RNA干扰H—ras基因对鼻咽癌细胞西妥昔单抗敏感性的影响

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目的探讨RNA干扰H-ras基因对鼻咽癌细胞西妥昔单抗敏感性的影响。方法采用逐步增加剂量法诱导建立西妥昔单抗耐药人鼻咽癌细胞系5-8WErbitux。Western blot法检测H-ras和K-ras蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测H—ras和K—ras基因的表达量。构建靶向H-ras基因的shRNA真核表达载体,转染5-8F/Erbitux细胞,分别检测转染后5-8F/Erbitux细胞中H—rgs蛋白及基因的表达以及对西妥昔单抗敏感性的改变。结果西妥昔单抗作用3d和5d,5-8F/Erbitux细胞的耐药指数(RI)分别为1.2和1.1。5-8F/Erbitux细胞中,H-ras和K—ras蛋白表达水平分别为0.798±0.019和0.190±0.011,显著高于5—8F细胞(0.075±0.005和0.079±0.009,P〈0.001);5-8F/Erbitux细胞中,H—ras和K—ras基因表达量分别为1.260±0.114和0.850±0.006,与5—8F细胞比较,H.ras基因表达量显著升高(P=0.016),K-ras基因表达量显著下降(P=0.000)。H—ras—shRNA转染后,5-8F/Erbitux细胞中H—ras蛋白及基因表达均下降,细胞凋亡率及西妥昔单抗细胞增殖抑制率均显著升高(P〈0.001)。结论通过下调H—ras基因的表达可以逆转5-8F/Erbitux细胞对西妥昔单抗的耐药,5-8F/Erbitux细胞耐药性的产生与H—ras基因扩增与过表达有关。

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