【摘 要】
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目的:通过结构分析和定点突变,构建干扰素α-2bHis89/His159(IFNα-2bHis89/His159),以期获得高性能干扰素突变体.方法:采用PCR体外定点突变技术,使干扰素α-2b基因的第89位
【机 构】
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中国医科大学生理教研室,北京三元基因工程有限公司,沧州职业技术学院
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目的:通过结构分析和定点突变,构建干扰素α-2bHis89/His159(IFNα-2bHis89/His159),以期获得高性能干扰素突变体.方法:采用PCR体外定点突变技术,使干扰素α-2b基因的第89位密码子由编码酪氨酸的TAC突变为编码组氨酸的CAC,第159位密码子由编码谷氨酸的GAA突变为编码组氨酸的CAC.将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).表达的IFNα-2bHis89/His159经包涵体变性、复性、DEAE层析和CM层析纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定.以SD大鼠进行初步药代动力学研究.结果:IFNα-2bHis89/His159主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.纯化后,IFNα-2bHis89/His159的纯度大于95%,比活性大于2.8×108IU/mg.相对于IFNα-2b较短的消除半衰期,IFNα-2bHis89/His159的消除半衰期得到延长,为2.34±0.27h.结论:构建了IFNα-2bHis89/His159的重组表达载体,并成功地在大肠杆菌中实现了高效表达,建立了IFNα-2bHis89/His159的纯化工艺,获得了体外活性增高并且体内稳定性得到改善的新型干扰素α-2b突变体.
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