【摘 要】
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目的 研究电针联合HIF-1α、GDNF基因修饰的NSCs移植对急性脊髓损伤大鼠模型的治疗作用及与Notch信号通路的相关性。方法提取神经干细胞,传代培养,并运用免疫荧光染色法鉴定;HIF-1α、GDNF基因修饰NSCs,并运用qRT-PCR法鉴定。SD大鼠(SPF级)48只,随机分为4组:A组(对照组)、B组(模型组)、C组(模型组+HIF-1α、GDNF基因修饰神经干细胞移植)、D组(在C组基
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81774349);
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目的 研究电针联合HIF-1α、GDNF基因修饰的NSCs移植对急性脊髓损伤大鼠模型的治疗作用及与Notch信号通路的相关性。方法提取神经干细胞,传代培养,并运用免疫荧光染色法鉴定;HIF-1α、GDNF基因修饰NSCs,并运用qRT-PCR法鉴定。SD大鼠(SPF级)48只,随机分为4组:A组(对照组)、B组(模型组)、C组(模型组+HIF-1α、GDNF基因修饰神经干细胞移植)、D组(在C组基础上+电针治疗),每组12只大鼠。A组:正常饲养,不做任何处理;B、C、D组:采用改良Allen,s法制作T11脊髓损伤模型,造模成功后,B组损伤部位注射生理盐水;C、D组损伤部位进行HIF-1α、GDNF基因修饰的NSCs移植,且D组取双侧心、肺腧穴予电针治疗1次/d,直至取材为止。于造模前及治疗的每个时间点采用BBB评分法对大鼠进行行为学评分,后取脊髓损伤段运用HE染色法观察各组脊髓病理改变;免疫组化法检测GFAP的表达;WesternBlot法检测DLL1蛋白表达。结果 Nestin免疫荧光染色结果示,所提取的细胞符合神经干细胞特征;运用qRT-PCR鉴定结果示,GDNF、Hif-1α转染后mRNA表达明显,表明NSCs双基因修饰成功;与A组比较,B组BBB评分明显降低,HE染色示,大量神经细胞坏死、变性,可见轴突肿胀和空泡出现,大量炎症细胞浸润,GFAP、DLL1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01);随时间递增,与B组比较,C、D组BBB评分增加,HE染色示,神经细胞萎缩凋亡减少,神经纤维开始恢复,GFAP、DLL1表达均降低(P<0.05),D组在21d时最显著(P﹤0.01)。结论 电针督脉联合GDNF、HIF-1α基因修饰NSCs移植疗法通过调控Notch信号通路改善微环境,阻止瘢痕形成,防止神经细胞凋亡、萎缩,促进轴突生长及神经通路的再通,提高神经干细胞存活率,为其分化修复神经细胞创造条件,从而对SCI大鼠起治疗作用。
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