【摘 要】
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目的研究新型凋亡因子—TRAIL基因在肿瘤基因治疗中的作用。方法用RT-PCR法,从Balb/c小鼠脾脏的总RNA中扩增出编码凋亡诱导功能区的TRAILcDNA片段,并克隆入pUC-T载体中。经DN
【机 构】
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上海第二医科大学人类基因治疗研究中心; 上海第二医科大学人类基因治疗研究中心 上海200025; 上海200025; 上海200025;
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目的研究新型凋亡因子—TRAIL基因在肿瘤基因治疗中的作用。方法用RT-PCR法,从Balb/c小鼠脾脏的总RNA中扩增出编码凋亡诱导功能区的TRAILcDNA片段,并克隆入pUC-T载体中。经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入真核表达载体pSEC-hy-gromycin的免疫球蛋白κ链信号肽编码区的下游,形成含有κ链信号肽与TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,构建可分泌表达TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL。该重组载体经阳离子脂质体转染入小鼠前胃癌细胞株MFC615中,以台盼蓝拒染法和Hoechst33258荧光染色法,观察重组TRAIL对肿瘤细胞的凋亡效应。结果TRAIL的cDNA克隆成功,构建了可高效分泌表达可溶性TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL,该产物能显著促进MFC615肿瘤细胞凋亡。结论重组真核表达载体pSEC/TRAIL的成功构建,为研究肿瘤的基因治疗提供了理想的工具。
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