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应用克隆的基因组序列作为同源臂,构建了小鼠β-酪蛋白基因定位敲人打靶载体.短臂长2.7kb,包括小鼠p-酪蛋白基因5'端侧翼区、第1外显子、第1内含子、部分第2外显子.长臂包括小鼠β-酪蛋白基因部分第2内含子、第3～7外显子、第3～6内含子、部分第7内含子,长3.4 kb.人t-PA突变体cDNA在第2外显子中与小鼠β-酪蛋白信号肽序列融合.正筛选标记neo放置在β-酪蛋白基因第2内含子中部,负筛选标记tk位于短臂外侧.ES细胞株TC-1在滋养层上培养扩增.处理ES细胞使其密度达到2×1