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目的：抗转铁蛋白受体（TfR）双价抗体（bsFv）构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法：以抗TfR的单链抗体（scFv）为模板，设计引物引入中问连接肽（G4S）及酶切位点AscI，通过PCR方法扩增两条scFv片段，将其连接并克隆至原核表达载体pAB1，转化大肠杆菌TG1，阳性菌经IPTG诱导表达，FCM检测bsFv与K562，HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果：酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功；SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致；FC