【摘 要】
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目的 观察应用扶正化瘀方后急性肝损伤小鼠模型肝脏CD8+T淋巴细胞对共培养的肝星状细胞的影响,探讨扶正化瘀方预防肝纤维化的作用机制.方法 18只SPF级雄性C57BL/6NCrl Vr小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组,每组6只.扶正化瘀方组提前给予扶正化瘀方灌胃5 d.实验前12 h以2 mL/kg体质量的剂量腹腔注射10％的CCl4,腹主静脉取血,留取血清并检测ALT、AST,留取部分肝脏做病理观察;应用流式细胞术分选小鼠肝脏CD8+T淋巴细胞,预先小鼠体内用药,再与小鼠肝星状细胞株(JS 1)
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院,上海201203;上海中医药大学肝病研究所,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院,上海201203;上海中医药大学肝病研究所,上海201203;肝肾疾病病证教育部重
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目的 观察应用扶正化瘀方后急性肝损伤小鼠模型肝脏CD8+T淋巴细胞对共培养的肝星状细胞的影响,探讨扶正化瘀方预防肝纤维化的作用机制.方法 18只SPF级雄性C57BL/6NCrl Vr小鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组,每组6只.扶正化瘀方组提前给予扶正化瘀方灌胃5 d.实验前12 h以2 mL/kg体质量的剂量腹腔注射10％的CCl4,腹主静脉取血,留取血清并检测ALT、AST,留取部分肝脏做病理观察;应用流式细胞术分选小鼠肝脏CD8+T淋巴细胞,预先小鼠体内用药,再与小鼠肝星状细胞株(JS 1)以2:1比例共培养于96孔板中24 h、48 h,使用qPCR方法检测各组Col.ImRNA和α-SMA mRNA表达变化.符合正态分布的计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或LSD-t检验.结果 模型组的ALT和AST水平均显著高于正常组(P值均<0.0001).扶正化瘀方组小鼠的ALT升高的幅度明显小于模型组(P<0.001).HE染色显示,扶正化瘀方组小鼠肝细胞变性、坏死程度较模型组有所减轻.与正常组比较,模型组总淋巴细胞、CD45、CD4-CD8+T、CD8+CD28-T显著上升,而扶正化瘀方组与模型组相比较,上述淋巴细胞比例显著降低(P值均<0.001).自各组小鼠肝脏分离的CD8+T淋巴细胞与JS 1共培养48 h,模型组与对照组(JS 1单培养)和正常组相比α-SMA mRNA的表达明显增加(P值均<0.01);Col.I mRNA表达也明显高于对照组和正常组(正常小鼠肝脏CD8+T淋巴细胞与JS 1共培养)(P值均<0.001).扶正化瘀方组α-SMA mR-NA和Col.I mRNA表达显著低于模型组(P值均<0.01).结论 扶正化瘀方能通过改变小鼠肝脏CD8+T淋巴细胞功能表型间接抑制活化的肝星状细胞.
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