杉木ISSR—PCR反应体系的正交优化

来源 :中南林业科技大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinzhichaoniao
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利用正交设计实验对影响杉木ISSR-PCR扩增的重要因素(Mg^2+、dNTP、模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶)进行优化,以建立杉木ISSR-PCR反应的最佳体系。结果发现杉木ISSR-PCR最佳反应体系(20μL)为:MgCl21.8 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.7μmol/L,模板DNA 90 ng,TaqDNA聚合酶1 U;退火温度为52-55℃。扩增反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,52℃退火40 s,72℃延伸2 min,40个循环;72℃
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