目的探讨诱导视网膜干细胞(retinal stem cell,RSC)分化为视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的体外培养方法,提供视神经损伤后细胞移植治疗所需的种子细胞。方法悬浮培养胎龄14 d LE大鼠来源的RSC,传2代流式细胞仪和免疫荧光鉴定后,用5%血清、BDNF、DAPT、DAPT联合BDNF 4组不同方式诱导14 d。流式细胞仪行成熟RGC特异性标志物thy1.1鉴定,并对DAPT联合BDNF组不同诱导时间点行RGC相关标志物math5、brn3b、thy1.1和神经干细胞标志物nestin、ki67表达的鉴定。结果传2代的RSCs nestin、chx10、ki67表达强阳性,部分细胞math5表达阳性;5%血清、BDNF、DAPT、DAPT联合BDNF组诱导RSCs 14 d后thy1.1阳性率分别为(11.38±1.58)%、(19.10±2.29)%、(23.90±1.09)%、(31.31±2.98)%,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。DAPT联合BDNF组诱导3~5 d后部分细胞nestin、ki67、brn3b、math5均阳性表达。结论使用DAPT联合BDNF诱导,可以提高RSCs在体外分化成RGCs的比率,并且诱导3~5 d后,RGCs相关标志物出现,细胞仍具有一定增殖能力。