观察纳米金结合重组人血管内皮抑素对原代人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其机制。
方法将原代HUVECs培养传至第4代,分为对照组、重组人血管内皮抑素组(ES)、纳米金组(AU)和纳米金结合重组人血管内皮抑素组(AU-ES)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法分别检测在24、48、72 h和25、50、100 μg/ml下各组细胞增殖抑制率,可得出最佳时间及浓度组合条件;在该条件下采用流式细胞仪、Transwell实验观察各组HUVECs的凋亡率、迁移能力的变化;采用Western blot检测各组与细胞增殖、凋亡及迁移功能相关蛋白质表达水平变化。
结果(1)CCK-8结果表明在不同浓度及时间下,AU-ES组(24 h,100 μg/ml)增殖抑制率为(35.166±3.076)%,差异有统计学意义(t=4.251,P=0.013);(24 h,100 μg/ml)为最佳处理条件;(2)流式细胞仪结果表明在24 h,100 μg/ml下,AU-ES组对HUVECs的凋亡率为(27.197±0.390)%,与对照组[(10.357±3.012)%]比较,差异有统计学意义(t=9.603,P=0.001);(3)Transwell实验24 h后小室底膜迁移面积比为(42.943±3.129)%,与对照组(58.98±1.543)%比较,差异有统计学意义(t=7.963,P=0.001);(4)与细胞增殖、凋亡及迁移有关蛋白如:B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、c-Myc、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮因子生长受体-2(VEGFR-2)、波形蛋白(Vimentin),与对照组比较AU-ES组的蛋白表达水平是明显降低。
结论在一定条件下AU-ES能对原代HUVECs具有抑制增殖及迁移、促进凋亡的作用,并且降低有关蛋白的表达。