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摘 要：本实验对注射用盐酸吉西他滨的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。按《中国药典》2010版附录ⅪE细菌内毒素检查方法进行。利用不同厂末生产的鲎试荆进行干扰试验，全面考察注射用盐酸吉西他滨对细茼内毒素控查的干扰作用，以确定最佳试验条件。注射用盐酸吉西他滨可以采用稀释方法排除干扰。本细茵内毒素检查结果安全、可靠。
关键词：注射用盐酸吉西他滨；细菌内毒素；研究
注射用盐酸吉西他滨可用于治疗局部晚期或已转移的非小细胞、肺癌局部晚期或已转移的胰腺癌.吉西他滨与紫杉醇联合，适用于治疗经辅助/新辅助化疗后复发，不能切除的、局部复发或转移性乳腺癌。一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素（Exotoxin），另一类为内毒素（Endotoxin）[1-8]。细菌内毒素的生物活性主要有致热性、白细胞减少、降低血压、诱导对内毒素的耐受性、诱导抗感染的特异性抵抗力、肿瘤细胞坏死作用等[9-15]。本实验对注射用盐酸吉西他滨的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器Ms3digital旋涡混合器（上海诚铭科技有限公司），净化工作台（深圳市百鑫净化科技有限公司），DK-600S电热恒温水槽（南京顺流仪器有限公司），DMH一1电热干燥箱（北京泰泽嘉业科技发展有限公司）。
1.1.2 试剂 鲎试剂（上海武昊经贸有限公司）；鲎试剂2（湛江博康海洋生物有限公司）鲎试剂3（科德角国际生物医学科技有限公司）；鲎试验用水（湛江博康海洋生物有限公司）；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所）；pH调节剂（湛江博康海洋生物有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 试验准备所有容器、用具都必须经过处理，去除外源性内毒素，玻璃用具的灭菌处理为180℃2小时或250℃30分钟以上，塑料用具须确证不干扰实验结果。
1.2.2 鲎试剂灵敏度复核按《中国药典》2010版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核。上海武昊经贸有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、科德角国际生物医学科技有限公司三个厂家的鲎试剂均符合规定。
1.2.3 注射用盐酸吉西他滨细菌内毒素检查干扰试验
（1）扰预试验。注射用盐酸吉西他滨细菌内毒素检查干扰本品，加鲎试验用水进行供试品溶液和供试品阳性对照溶液的配制。供试品溶液配制：取三个批号的供试品，分别用用鲎试验用水10mL充分振摇使溶解。制备成0.625mg/mL、1.2mg/mL、2.5mg/mL、5.0mg/mL、10mg/mL五个浓度，并用pH调节剂调节pH值至6～8。细菌内毒素工作标准品溶液稀释方法：用lmL的鲎试验用水溶解1支细菌内毒素工作标准品，用旋涡混合器连续混合十分钟，再用鲎试验用水稀释成4λ、2λ，进行下一步稀释前，至少混和三十秒。供试品阳性对照溶液的配制：制备成0.625mg/mL+2λ、1.2mg/mL+2λ、2.5mg/mL+2λ、5.0mg/mL+2λ、10mg/mL+2λ五个浓度。试验过程：取上海武昊经贸有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、科德角国际生物医学科技有限公司三个厂家的鲎试剂，先分别加人0.1mL鲎试验用水溶解，再分别加入0.1mL供试品和供试品阳性各浓度稀释液，混匀后，于三十七摄氏度保温六十分钟，同时设阴性和阳性对照，每个浓度平行做2管。三个批号供试品溶液，三个厂家的鲎试剂结果均为浓度为0.625mg/mL未凝固；浓度为1.2mg/mL未凝固；浓度为2.5mg/mL未凝固；浓度为5.0mg/mL未凝固；浓度为10mg/mL未凝固.三个批号阳性对照溶液，三个厂家的鲎试剂结果均为浓度为0.625mg/mL凝固；浓度为1.2mg/mL凝固；浓度为2.5mg/mL凝固；浓度为10mg/mL未凝固。浓度为5.0mg/mL陽性对照溶液一个批次未凝固，其他两个批次未凝固。实验浓度选择含吉西他滨为2.5mg/mL的稀释液。
（2）供试品的干扰试验。为进一步确证供试品溶液对0.06EU/mL的鲎试剂是否存在干扰作用，分别用鲎试验用水和供试品2.5mg/mL稀释液进行实验，将细菌内毒素工作标准品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液。供试品2.5mg/mL稀释液的制备：取上述三个批号的供试品，分别用鲎试验用水稀释成含吉西他滨2.5mg/mL的供试液。用鲎试验用水与2.5mg/mL供试液分别将细菌内毒素工作标准品稀释成0.125EU/mL、0.06EU/mL、0.03EU/mL、0.015EU/mL四个浓度，作为细菌内毒素标准品溶液和细菌内毒素供试品溶液。取上述三个厂家的鲎试剂，每支分别加0.1毫升鲎试验用水溶解，加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液和供试液各1毫升，于三十七摄氏度保温六十分钟。供试品批号为131001，鲎试剂厂家为上海武昊经贸有限公司，细菌内毒素浓度0.125EU/mL凝聚，细菌内毒素浓度0.06EU/mL凝聚，细菌内毒素浓度0.03EU/mL一支凝聚其他未凝聚，细菌内毒素浓度0.015EU/mL未凝聚，E值均为0.5EU/mL，无干扰作用；供试品批号为131001，鲎试剂厂家为湛江博康海洋生物有限公司和科德角国际生物医学科技有限公司，细菌内毒素浓度0.125EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.06EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.03EU/mL均未凝聚，细菌内毒素浓度0.015EU/mL均未凝聚，E值均为0.6EU/mL，均无干扰作用供试品批号为131002、131003，三个鲎试剂厂家，细菌内毒素浓度0.125EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.06EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.03EU/mL均未凝聚，细菌内毒素浓度0.015EU/mL均未凝聚，E值均为0.5EU/mL，均无干扰作用。 2 结果
供试品浓度为0.25mg/mL时干扰试验测得的Et值均在0.5E-2.0ES之间，说明当供试品浓度为0.25mg/mL时对鲎试剂无干扰作用。本细茵内毒素检查方法安全、可靠。
参考文献
[1]黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药学杂志， 1997（02）.
[2]李国凤，刘丽，赵长美，曲建全，田振霞，石滨.肝素钠细菌内毒素检查与热原检查的比较[J].山东医药工业，2003（04）.
[3]程春雷，高天勤，曹珍艳.注射用盐酸丙帕他莫的细菌内毒素检查[J].中国医药工业杂志，2011（03）.
[4]王茂林.鲎试剂法检查热原的应用范围[J].中国医院药学杂志，1990（01）.
[5]王璐，张红宇，刘勤.注射用灯盏花素细菌内毒素检查方法研究[J].中国药房，2010（39）.
[6]章泽.注射用盐酸吉西他滨[J].江苏药学与临床研究，2006（03）.
[7]李留树，王如良.非小细胞肺癌的临床治疗进展[J].解放军保健医学杂志，2001（04）.
[8]徐雅兰.细菌内毒素检查法在药品检验中的应用[J].承德医学院学报，2000（03）.
[9]陈沐芳，王世萍，周瑗志.甘露醇注射液细菌内毒素检查方法的实验探讨[J].中国药业，1998（06）.
[10]张霞，申永壮.对甘露醇注射液与甲硝唑注射液的细菌内毒素試验的探讨[J].中国药业，1997（05）.
[11]雷宇.细菌内毒素检查法测定注射用硫酸链霉素热原的观察[J].医学文选，2001（06）.
[12]梁勇.注射用磷霉素钠细菌内毒素检查法初探[J].中国现代应用药学，2002（03）.
[13]伍利锋，汪穗福，颜可智.鲎试剂检测化学类药品细菌内毒素的研究现状[J].中国药业，2001（04）.
[14]赵可新，胡建平，单靖珊，马骐，葛军.盐酸吉西他滨临床应用进展[J].中国医药导报，2006（36）.
[15]马莉，张凇，王安航，龚慕辛，萧伟.细菌内毒素定量检测方法的常见问题剖析[J].中国医院药学杂志，2013（09）.
关键词：注射用盐酸吉西他滨；细菌内毒素；研究
注射用盐酸吉西他滨可用于治疗局部晚期或已转移的非小细胞、肺癌局部晚期或已转移的胰腺癌.吉西他滨与紫杉醇联合，适用于治疗经辅助/新辅助化疗后复发，不能切除的、局部复发或转移性乳腺癌。一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素（Exotoxin），另一类为内毒素（Endotoxin）[1-8]。细菌内毒素的生物活性主要有致热性、白细胞减少、降低血压、诱导对内毒素的耐受性、诱导抗感染的特异性抵抗力、肿瘤细胞坏死作用等[9-15]。本实验对注射用盐酸吉西他滨的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器Ms3digital旋涡混合器（上海诚铭科技有限公司），净化工作台（深圳市百鑫净化科技有限公司），DK-600S电热恒温水槽（南京顺流仪器有限公司），DMH一1电热干燥箱（北京泰泽嘉业科技发展有限公司）。
1.1.2 试剂 鲎试剂（上海武昊经贸有限公司）；鲎试剂2（湛江博康海洋生物有限公司）鲎试剂3（科德角国际生物医学科技有限公司）；鲎试验用水（湛江博康海洋生物有限公司）；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所）；pH调节剂（湛江博康海洋生物有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 试验准备所有容器、用具都必须经过处理，去除外源性内毒素，玻璃用具的灭菌处理为180℃2小时或250℃30分钟以上，塑料用具须确证不干扰实验结果。
1.2.2 鲎试剂灵敏度复核按《中国药典》2010版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核。上海武昊经贸有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、科德角国际生物医学科技有限公司三个厂家的鲎试剂均符合规定。
1.2.3 注射用盐酸吉西他滨细菌内毒素检查干扰试验
（1）扰预试验。注射用盐酸吉西他滨细菌内毒素检查干扰本品，加鲎试验用水进行供试品溶液和供试品阳性对照溶液的配制。供试品溶液配制：取三个批号的供试品，分别用用鲎试验用水10mL充分振摇使溶解。制备成0.625mg/mL、1.2mg/mL、2.5mg/mL、5.0mg/mL、10mg/mL五个浓度，并用pH调节剂调节pH值至6～8。细菌内毒素工作标准品溶液稀释方法：用lmL的鲎试验用水溶解1支细菌内毒素工作标准品，用旋涡混合器连续混合十分钟，再用鲎试验用水稀释成4λ、2λ，进行下一步稀释前，至少混和三十秒。供试品阳性对照溶液的配制：制备成0.625mg/mL+2λ、1.2mg/mL+2λ、2.5mg/mL+2λ、5.0mg/mL+2λ、10mg/mL+2λ五个浓度。试验过程：取上海武昊经贸有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、科德角国际生物医学科技有限公司三个厂家的鲎试剂，先分别加人0.1mL鲎试验用水溶解，再分别加入0.1mL供试品和供试品阳性各浓度稀释液，混匀后，于三十七摄氏度保温六十分钟，同时设阴性和阳性对照，每个浓度平行做2管。三个批号供试品溶液，三个厂家的鲎试剂结果均为浓度为0.625mg/mL未凝固；浓度为1.2mg/mL未凝固；浓度为2.5mg/mL未凝固；浓度为5.0mg/mL未凝固；浓度为10mg/mL未凝固.三个批号阳性对照溶液，三个厂家的鲎试剂结果均为浓度为0.625mg/mL凝固；浓度为1.2mg/mL凝固；浓度为2.5mg/mL凝固；浓度为10mg/mL未凝固。浓度为5.0mg/mL陽性对照溶液一个批次未凝固，其他两个批次未凝固。实验浓度选择含吉西他滨为2.5mg/mL的稀释液。
（2）供试品的干扰试验。为进一步确证供试品溶液对0.06EU/mL的鲎试剂是否存在干扰作用，分别用鲎试验用水和供试品2.5mg/mL稀释液进行实验，将细菌内毒素工作标准品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液。供试品2.5mg/mL稀释液的制备：取上述三个批号的供试品，分别用鲎试验用水稀释成含吉西他滨2.5mg/mL的供试液。用鲎试验用水与2.5mg/mL供试液分别将细菌内毒素工作标准品稀释成0.125EU/mL、0.06EU/mL、0.03EU/mL、0.015EU/mL四个浓度，作为细菌内毒素标准品溶液和细菌内毒素供试品溶液。取上述三个厂家的鲎试剂，每支分别加0.1毫升鲎试验用水溶解，加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液和供试液各1毫升，于三十七摄氏度保温六十分钟。供试品批号为131001，鲎试剂厂家为上海武昊经贸有限公司，细菌内毒素浓度0.125EU/mL凝聚，细菌内毒素浓度0.06EU/mL凝聚，细菌内毒素浓度0.03EU/mL一支凝聚其他未凝聚，细菌内毒素浓度0.015EU/mL未凝聚，E值均为0.5EU/mL，无干扰作用；供试品批号为131001，鲎试剂厂家为湛江博康海洋生物有限公司和科德角国际生物医学科技有限公司，细菌内毒素浓度0.125EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.06EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.03EU/mL均未凝聚，细菌内毒素浓度0.015EU/mL均未凝聚，E值均为0.6EU/mL，均无干扰作用供试品批号为131002、131003，三个鲎试剂厂家，细菌内毒素浓度0.125EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.06EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.03EU/mL均未凝聚，细菌内毒素浓度0.015EU/mL均未凝聚，E值均为0.5EU/mL，均无干扰作用。 2 结果
供试品浓度为0.25mg/mL时干扰试验测得的Et值均在0.5E-2.0ES之间，说明当供试品浓度为0.25mg/mL时对鲎试剂无干扰作用。本细茵内毒素检查方法安全、可靠。
参考文献
[1]黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药学杂志， 1997（02）.
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[5]王璐，张红宇，刘勤.注射用灯盏花素细菌内毒素检查方法研究[J].中国药房，2010（39）.
[6]章泽.注射用盐酸吉西他滨[J].江苏药学与临床研究，2006（03）.
[7]李留树，王如良.非小细胞肺癌的临床治疗进展[J].解放军保健医学杂志，2001（04）.
[8]徐雅兰.细菌内毒素检查法在药品检验中的应用[J].承德医学院学报，2000（03）.
[9]陈沐芳，王世萍，周瑗志.甘露醇注射液细菌内毒素检查方法的实验探讨[J].中国药业，1998（06）.
[10]张霞，申永壮.对甘露醇注射液与甲硝唑注射液的细菌内毒素試验的探讨[J].中国药业，1997（05）.
[11]雷宇.细菌内毒素检查法测定注射用硫酸链霉素热原的观察[J].医学文选，2001（06）.
[12]梁勇.注射用磷霉素钠细菌内毒素检查法初探[J].中国现代应用药学，2002（03）.
[13]伍利锋，汪穗福，颜可智.鲎试剂检测化学类药品细菌内毒素的研究现状[J].中国药业，2001（04）.
[14]赵可新，胡建平，单靖珊，马骐，葛军.盐酸吉西他滨临床应用进展[J].中国医药导报，2006（36）.
[15]马莉，张凇，王安航，龚慕辛，萧伟.细菌内毒素定量检测方法的常见问题剖析[J].中国医院药学杂志，2013（09）.