【摘 要】
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目的:为了获得小鼠催产素受体(mouse oxytocin receptor,mOTR)基因的全长编码区和构建mOTR的真核表达载体,以及在哺乳动物细胞中真核表达mOTR.方法:采用RT-PCR方法,获得有相
【机 构】
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第四军医大学神经科学研究所,陕西,西安,710032
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
论文部分内容阅读
目的:为了获得小鼠催产素受体(mouse oxytocin receptor,mOTR)基因的全长编码区和构建mOTR的真核表达载体,以及在哺乳动物细胞中真核表达mOTR.方法:采用RT-PCR方法,获得有相互重叠序列的mOTR的羧基端和氨基端的cDNA片段并分别将其亚克隆入PMD 18-T载体.通过对这2个片段加入酶切位点、双酶切和相互连接,获得全长的编码序列.然后将mOTR的全长的编码序列克隆入真核表达载体pEG-FP-N3,再用脂质体转染法将pEGFP-N3-mOTR质粒转染到COS-7细胞中并进行了瞬时真核表达.结果:将mOTR的羧基端和氨基端的cDNA片段亚克隆入了PMD 18-T载体.连接并最终获得了mOTR编码区的全长序列,构建了pEGFP-N3-mOTR真核表达载体.将pEGFP-N3-mOTR载体转染入COS-7细胞,并成功地进行了瞬时真核表达.结论:成功构建了包含mOTR全长编码区序列的pEGFP-N3-mOTR真核表达载体,并在COS-7细胞中进行了瞬时表达,为今后研究mOTR的功能打下了基础.
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