【摘 要】
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本研究使用蛋白标记药物Puromycin标记NDV感染后DF-1细胞新合成的蛋白,发现NDV感染后新蛋白合成量显著下调,而病毒NP蛋白的含量却随感染时间的延长呈增加趋势.为探究NDV的感
【机 构】
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新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐830052中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;
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本研究使用蛋白标记药物Puromycin标记NDV感染后DF-1细胞新合成的蛋白,发现NDV感染后新蛋白合成量显著下调,而病毒NP蛋白的含量却随感染时间的延长呈增加趋势.为探究NDV的感染对DF-1细胞核糖体大亚基L11蛋白(RPL 11)表达水平的影响,分别收获NDV(MOI 1)感染后不同时间(8h、16h、24h和32 h)和不同剂量NDV(MOI1、0.1)感染后相同时间的细胞样品,采用western blot、激光共聚焦、荧光定量PCR分别检测内源性RPL 11的蛋白表达和mRNA转录水平.Western blot结果显示NDV感染后核糖体蛋白RPL 11的表达量显著降低,并且与病毒感染时间和感染剂量呈正相关.激光共聚焦结果显示,NDV感染后细胞核与细胞质中的RPL 11荧光信号均明显减弱.但荧光定量PCR结果显示,该基因的转录水平却无明显变化,表明其蛋白表达量的减少发生在翻译后修饰环节.构建重组质粒pFlag-RPL 11转染DF-1细胞24h后再感染不同剂量NDV(MOI 1、0.1),通过western blot检测外源性RPL 11的表达水平.结果 显示外源性RPL 11蛋白的表达量在病毒感染后也呈明显下降趋势,并也与病毒感染剂量呈正相关.在NDV感染(MOI1)的DF-1细胞培养基中添加泛素蛋白酶体抑制剂MG132,病毒滴度测定结果表明该药物对病毒增殖无明显影响,却能够显著抑制NDV感染后RPL 11蛋白的降解,表明RPL 11的降解依赖泛素蛋白酶体途径.上述结果证实NDV感染细胞后能够引起RPL 11蛋白的泛素化降解,且该降解过程能够被MG132所抑制.本研究为解析NDV感染后宿主细胞内蛋白翻译的变化提供了新的着眼点.
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