【摘 要】
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作为研究基因表达调控的重要方法,近年来染色质免疫共沉淀(ChIP)得到了越来越广泛的应用,但有关将乳腺组织作为ChIP材料的研究及其方法尚未见报道。采用传统的组织ChIP试剂盒
【机 构】
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广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 遵义医学院基础医学院; 广西大学生命科学与技术学院;
【基金项目】
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国家“863”计划(2011AA100607);高等学校博士学科点专项科研基金(20126401110001);广西自然科学基金(2014GXNSFAA118084)资助项目
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作为研究基因表达调控的重要方法,近年来染色质免疫共沉淀(ChIP)得到了越来越广泛的应用,但有关将乳腺组织作为ChIP材料的研究及其方法尚未见报道。采用传统的组织ChIP试剂盒处理乳腺组织时,存在样品回收率低、乳脂/乳蛋白影响杂交效率和超声积热等问题,针对以上问题对乳腺组织ChIP方法进行改进。新方法省略组织均一化步骤、用酶切-超声法代替超声法进行染色质片段化、在细胞裂解和酶切步骤间增加洗涤步骤。结果显示,与脾脏组织相比,乳腺组织不适合进行组织均一化处理。酶切-超声法比超声法更适于对乳腺组织进行染色质片段化。采用改进后的ChIP方法获得的DNA样品中,靶序列得到显著的富集,所得的DNA样品能够满足测序(ChIP-Seq)要求。结果说明,改进后的方法适用于乳腺组织染色质免疫共沉淀,并为研究乳腺组织基因表达调控奠定了基础。
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