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目的：探索一种稳定、简单、成功率高的，分离成年SD大鼠心肌细胞的方法。方法：采用Langendorff灌流法及二步酶解法获取单个心肌细胞，并与四步法进行比较。结果：二步法可获得横纹清晰、立体感强的单个心肌细胞，初步存活率（79．1±2．9）％，复钙后存活率（46．8±2．8）％，分别显著高于四步法的[（75．2±4．2）％，（40．2±2．2）％，P均〈0．05]。与四步法相比，二步法酶解所需时间和平均试验成本明显减少[（40．2±3．3）min：（30．