【摘 要】
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提取家蚕组织DNA的方法已有不少报道,如夏庆友等[1]参照文献[2]改进的方法,其基本步骤是将家蚕组织在液氮中手工研磨或用玻璃匀浆器匀浆,加提取缓冲液和Proteinase K,在50～65
【机 构】
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农业部家蚕生物技术重点开放实验室,中国农业科学院蚕业研究所,镇江,212018
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提取家蚕组织DNA的方法已有不少报道,如夏庆友等[1]参照文献[2]改进的方法,其基本步骤是将家蚕组织在液氮中手工研磨或用玻璃匀浆器匀浆,加提取缓冲液和Proteinase K,在50～65℃水浴恒温振荡3～6h,然后用酚、氯仿抽提数次,无水乙醇沉淀,75%乙醇洗涤后溶于适当体积的0.1×TE缓冲液,加RNA酶消解RNA,保存备用.该方法适于提取丝腺、卵的基因组DNA.然而,家蚕蛹体由于脂肪、色素较多,且整体组织中含有大量的DNA酶,按上述方法提取DNA纯度不高,并容易降解.我们分析认为可能是提取液中的EDTA浓度太低,不足以抑制整体组织中的DNA酶.刘春宇等[3]提取家蚕蛹体DNA则是预先在1×SSC溶液中匀浆、离心、漂洗,然后将沉淀进行抽提.该方法有效地去除部分蛋白质、脂肪、色素等杂质.上述方法都使用了Proteinase K,所以试验费用较昂贵,整个提取过程花费时间也较长.为此,我们设计了一套经济、快速地制备家蚕蛹体基因组DNA的方法,经试验此法也适用于各不同发育阶段的家蚕组织.
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