【摘 要】
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目的:利用表达载体pNSGroE2His构建104M∶Omp19过表达株,以增强现有布鲁菌疫苗104M株免疫保护效果.方法:以布鲁菌疫苗104M株基因组为模板,通过PCR扩增得到Omp19基因;将经过Ba
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京,100071
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目的:利用表达载体pNSGroE2His构建104M∶Omp19过表达株,以增强现有布鲁菌疫苗104M株免疫保护效果.方法:以布鲁菌疫苗104M株基因组为模板,通过PCR扩增得到Omp19基因;将经过BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切的Omp19基因连接到经同样双酶切处理的pNSGroE2His载体上,构建Omp19-pNSGroE2His过表达质粒;将构建的过表达质粒转化布鲁菌104M株感受态细胞,利用氯霉素抗性筛选构建成功的104M∶Omp19过表达株;通过皮下免疫BALB/c小鼠,从激发的抗体水平、细胞因子水平以及对抗布鲁菌A19株攻毒后的保护作用等方面评价104M∶Omp19过表达株的免疫保护效力.结果:PCR及Western印迹验证表明获得了104M∶Omp19过表达突变株;免疫评价实验显示104M∶Omp19在抗体水平、细胞因子水平与攻毒保护性方面均优于104M,低剂量免疫即可达到较好的保护效果.结论:布鲁菌疫苗104M株过表达Omp19抗原后,免疫保护效果显著增强,可作为一种新的布鲁菌疫苗候选菌株进行后续研究.
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