【摘 要】
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目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体, 转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性.方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA, RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA, 构建于
【机 构】
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清华大学生物科学与技术系,北京,100084清华大学深圳研究生院生命学部,广东,深圳,518055;
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目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体, 转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性.方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA, RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA, 构建于真核表达载体pcDNA3.1D中, 并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中.将构建好的质粒转染大鼠施旺细胞RSC96, 检测HAS-3的表达及酶活性.研究转染细胞培养上清对巨噬细胞的趋化作用.结果:HAS-3真核表达载体pcDNA3.1D-HAS3及pEGFP-HAS3测序结果显示片段插入正确, 序列与GenBank公布数据一致, 转染RSC96细胞并检测到重组蛋白的表达和酶活性, 过表达HAS-3细胞的培养上清对巨噬细胞的趋化作用显著高于未转染细胞上清.结论:成功地构建HAS-3真核表达载体且真核表达的重组HAS-3具有合成HA活性, HAS-3过表达培养上清能趋化巨噬细胞, 在体内可能参与到炎症反应中.
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