【摘 要】
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目的 探讨重组酶聚合酶扩增(RPA)结合Cas12a检测输血相关病原体的可行性.方法 1)根据输血相关病原体HIV、HBV、HCV基因组保守区设计、筛选相应Cas12a crRNA.2)据crRNA靶序列
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院输血研究所,四川成都610052中国医学科学院北京协和医学院输血研究所,四川成都610052;中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室;
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目的 探讨重组酶聚合酶扩增(RPA)结合Cas12a检测输血相关病原体的可行性.方法 1)根据输血相关病原体HIV、HBV、HCV基因组保守区设计、筛选相应Cas12a crRNA.2)据crRNA靶序列区叠瓦状设计RPA巢式扩增内、外侧引物,凝胶电泳法和荧光探针法筛选巢式RPA内、外侧引物.3)通过质粒或病毒模拟标本梯度稀释,将含不同拷贝数或含量的靶序列RPA扩增,扩增产物以Cas12a检测评价RPA结合Cas12a的检测下限.4)用HIV、HBV、HCV相应近源病毒HTLV、WMHBV、HGBV的同源序列的重组质粒来评价所选crRNA的特异性.结果 建立起RPA结合Cas12a核酸检测系统,16份重组质粒的检测下限为10 cp,8份EcoHIV病毒模拟标本的检测下限为1fg,HIV、HBV、HCV 3种重组质粒及RPA扩增产物的交叉检测间未出现错误检出;10例HIV阳性确证标本的检测结果均为阳性.结论 RPA结合Cas12a检测HIV、HBV、HCV核酸是1种检出限和特异性均较好的核酸检测方法.
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