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【摘 要】 目的 建立HPLC法测定丹芪益肾胶囊中淫羊藿的含量。方法 样品采用超声处理的方法提取。色谱柱为CenturySIL C18-BDS（250*4.6mm），流动相乙腈——水（30：70），检测波长为270nm，流速为1.0ml/min。结果 淫羊藿苷平均回收率为104.2%，RSD为1.4%（n= 6）。结论 含量测定的方法简便，准确，专属性强，稳定性好，灵敏度高，能够有效地控制丹芪益肾胶囊的质量。
【关键词】 丹芪益肾；淫羊藿苷；高效液相色谱法
丹芪益肾胶囊为山西省中医院制剂品种。功能主治：益肾健脾，活血化瘀。用于糖尿病、肾病，属脾肾两虚者。处方为太子参、黄芪、白术、薏苡仁、芡实、地黄、金樱子、淫羊藿、丹参、葛根、当归、大黄等十二味药。规格为每粒0.5g。控制质量的原有标准为薄层色谱测定大黄、黄芪、葛根三个鉴别项目。为了提高医院制剂的质量标准，山西省食品药品监督管理局规定，所有医院制剂品种，必须有含量测定项目控制质量[1]。为此，在原有测定标准的基础上新增加了淫羊藿的含量测定。并对新增加的项目进行了方法学验证。
1 资料与方法
1.1 仪器 Waterse2695高效液相色谱仪；检测器：Waterse 2998，柱温箱：4.2—680。AU200D型电子天平；KQ—300E型超声波清洗机（功率250w，频率33kHz）；容量瓶、漏斗等普通玻璃器皿。
1.2试剂 乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯净水自制，乙醇为分析纯，淫羊藿苷（供含量测定使用，中国药品生物制品检验所，批号为110737- -200414）。丹芪益肾胶囊为山西省中医院医院制剂室提供，批号为 20100615，20110813，20110814。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件与适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水（30∶70）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500[2]。
1.3.2 对照品溶液的制备
取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
1.3.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品内容物约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声处理1个小时，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取1ml置10ml的容量瓶，加乙醇至刻度，取续滤液，即得。
1.3.4 线性关系学考察
分别精密称取淫羊藿苷对照品，0.25mg，0.5mg，1mg，2mg，5mg，分别置10ml容量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀即得。制成每1ml含0.025mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.5mg的溶液，各取20ul注入色谱仪中测定，按色谱条件测得峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=18685649.34X-10481727.20 r=0.9993淫羊藿苷在0.025-0.5mg/ml呈良好的线性关系。
1.3.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液（0.1mg/ml）10ul重复进样6次，测定淫羊藿苷峰面积积峰值分别为1160509，1198036，1164502，1166923，1174455，1162996。平均值为1171236.9，RSD为1.2%.结果表明，进样与仪器检测精密度良好。
1.3.6 稳定性实验
取供试样品溶液分别在0、2、4、8、12、24小时进样10ul，测得样品峰面积积峰值为9673570，9678452，96013666，95165892，95597162，93690956。平均值为95664653，RSD为1.2%。结果表明，24小时内供试品溶液稳定。
1.3.7 重现性实验
取3个不同批号丹芪益肾胶囊，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样10ul测定峰面积积峰值，并计算含量（mg/g）34.5504，35.6062，34.4649，34.231 2，34.8349，35.1666。平均值为34.8090mg/g，RSD为1.5%。结果表明，仪器与试验方法可行。
1.3.8 回收率
采用加样回收法。取已知含量的样品，批号为（2110814）6份，分别加入一定量的淫羊藿苷对照品，照含量测定项下方法制备测试溶液，按上述色谱条件测定淫羊藿苷的含量，计算回收率。
2 结果
淫羊藿苷的回收率实验结果，平均回收率为104.2%，按照拟定的含量测定方法测定3批样品淫羊藿苷的含量平均值为34.7mg。根据测定范围的限量规定[3]，34.7×80%=27.7mg。本品以淫羊藿计算淫羊藿苷不得少于28.0mg。
3 讨论
3.1 测定成分的选择
该品种中最大处方量为：太子参、黄芪、芡实、丹参。黄芪为补气诸药之最，逐五脏之淤血，因此，原有标准上已有黄芪的薄层色谱方法控制质量。太子参、芡实、丹参，由于它们的化学成分较多，专属性不强。淫羊藿的醇浸出液及从200%淫羊藿水浸膏中提取的非氨基酸部分，能显著增加心脏的冠状动脉流量，并可促进血小板解聚，红血球积压明显减少。因此，最终选择了淫羊藿测定丹芪益肾胶囊中有效成分淫羊藿苷。
3.2 流量的考察
参照相关文献[1]《中国药典》选择色谱条件适应性系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水（30∶70）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500，使淫羊藿保留时间合适，分离效果较好。
3.3 提取方法的考察
丹芪益肾胶囊中淫羊藿为水煎煮液减压压缩至浸膏状，低温干燥，粉碎成细粉。由于淫羊藿醇浸出液及从200%淫羊藿水浸膏中提取出淫羊藿苷，因此，选择了加稀乙醇超声处理，简易可行。
3.4 方法探讨
在建立方法时，排除黄芪甲苷、丹参酮、葛根素、大黄素等其它成分干扰，因它们都是经过水煎液浓缩，只有淫羊藿苷直接醇浸从水浸中能完全提出，而且在270nm波长处无法测定其它几味药。所以，经过考察，该方法可用于丹参益肾胶囊的质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010： 306.
[2] 刘源，石继伟.高效液相色谱法测定安神补脑片中淫羊藿苷含量[J].中国药业，2014，23（1）：14-15.
[3] 邢婧，任红，汪轩等.HPLC法同时测定淫羊藿-川芎药对8种化学成分的含量[J].药物分析杂志，2015，35（6）：960-965.
【关键词】 丹芪益肾；淫羊藿苷；高效液相色谱法
丹芪益肾胶囊为山西省中医院制剂品种。功能主治：益肾健脾，活血化瘀。用于糖尿病、肾病，属脾肾两虚者。处方为太子参、黄芪、白术、薏苡仁、芡实、地黄、金樱子、淫羊藿、丹参、葛根、当归、大黄等十二味药。规格为每粒0.5g。控制质量的原有标准为薄层色谱测定大黄、黄芪、葛根三个鉴别项目。为了提高医院制剂的质量标准，山西省食品药品监督管理局规定，所有医院制剂品种，必须有含量测定项目控制质量[1]。为此，在原有测定标准的基础上新增加了淫羊藿的含量测定。并对新增加的项目进行了方法学验证。
1 资料与方法
1.1 仪器 Waterse2695高效液相色谱仪；检测器：Waterse 2998，柱温箱：4.2—680。AU200D型电子天平；KQ—300E型超声波清洗机（功率250w，频率33kHz）；容量瓶、漏斗等普通玻璃器皿。
1.2试剂 乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯净水自制，乙醇为分析纯，淫羊藿苷（供含量测定使用，中国药品生物制品检验所，批号为110737- -200414）。丹芪益肾胶囊为山西省中医院医院制剂室提供，批号为 20100615，20110813，20110814。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件与适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水（30∶70）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500[2]。
1.3.2 对照品溶液的制备
取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
1.3.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品内容物约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声处理1个小时，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取1ml置10ml的容量瓶，加乙醇至刻度，取续滤液，即得。
1.3.4 线性关系学考察
分别精密称取淫羊藿苷对照品，0.25mg，0.5mg，1mg，2mg，5mg，分别置10ml容量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀即得。制成每1ml含0.025mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.5mg的溶液，各取20ul注入色谱仪中测定，按色谱条件测得峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=18685649.34X-10481727.20 r=0.9993淫羊藿苷在0.025-0.5mg/ml呈良好的线性关系。
1.3.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液（0.1mg/ml）10ul重复进样6次，测定淫羊藿苷峰面积积峰值分别为1160509，1198036，1164502，1166923，1174455，1162996。平均值为1171236.9，RSD为1.2%.结果表明，进样与仪器检测精密度良好。
1.3.6 稳定性实验
取供试样品溶液分别在0、2、4、8、12、24小时进样10ul，测得样品峰面积积峰值为9673570，9678452，96013666，95165892，95597162，93690956。平均值为95664653，RSD为1.2%。结果表明，24小时内供试品溶液稳定。
1.3.7 重现性实验
取3个不同批号丹芪益肾胶囊，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样10ul测定峰面积积峰值，并计算含量（mg/g）34.5504，35.6062，34.4649，34.231 2，34.8349，35.1666。平均值为34.8090mg/g，RSD为1.5%。结果表明，仪器与试验方法可行。
1.3.8 回收率
采用加样回收法。取已知含量的样品，批号为（2110814）6份，分别加入一定量的淫羊藿苷对照品，照含量测定项下方法制备测试溶液，按上述色谱条件测定淫羊藿苷的含量，计算回收率。
2 结果
淫羊藿苷的回收率实验结果，平均回收率为104.2%，按照拟定的含量测定方法测定3批样品淫羊藿苷的含量平均值为34.7mg。根据测定范围的限量规定[3]，34.7×80%=27.7mg。本品以淫羊藿计算淫羊藿苷不得少于28.0mg。
3 讨论
3.1 测定成分的选择
该品种中最大处方量为：太子参、黄芪、芡实、丹参。黄芪为补气诸药之最，逐五脏之淤血，因此，原有标准上已有黄芪的薄层色谱方法控制质量。太子参、芡实、丹参，由于它们的化学成分较多，专属性不强。淫羊藿的醇浸出液及从200%淫羊藿水浸膏中提取的非氨基酸部分，能显著增加心脏的冠状动脉流量，并可促进血小板解聚，红血球积压明显减少。因此，最终选择了淫羊藿测定丹芪益肾胶囊中有效成分淫羊藿苷。
3.2 流量的考察
参照相关文献[1]《中国药典》选择色谱条件适应性系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水（30∶70）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500，使淫羊藿保留时间合适，分离效果较好。
3.3 提取方法的考察
丹芪益肾胶囊中淫羊藿为水煎煮液减压压缩至浸膏状，低温干燥，粉碎成细粉。由于淫羊藿醇浸出液及从200%淫羊藿水浸膏中提取出淫羊藿苷，因此，选择了加稀乙醇超声处理，简易可行。
3.4 方法探讨
在建立方法时，排除黄芪甲苷、丹参酮、葛根素、大黄素等其它成分干扰，因它们都是经过水煎液浓缩，只有淫羊藿苷直接醇浸从水浸中能完全提出，而且在270nm波长处无法测定其它几味药。所以，经过考察，该方法可用于丹参益肾胶囊的质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010： 306.
[2] 刘源，石继伟.高效液相色谱法测定安神补脑片中淫羊藿苷含量[J].中国药业，2014，23（1）：14-15.
[3] 邢婧，任红，汪轩等.HPLC法同时测定淫羊藿-川芎药对8种化学成分的含量[J].药物分析杂志，2015，35（6）：960-965.