论文部分内容阅读
目的研究丙型肝炎病毒非结构区3(HCV NS3)蛋白对端粒酶活性的影响,以探讨HCV NS3蛋白在HCV致癌中的作用.方法利用HCV NS3真核细胞表达质粒pRcHCNS3-5＇(表达HCV NS3 N端多肽)和pRcHCNS3-3＇(表达HCV NS3 C端多肽)转染NIH3T3细胞;采用S-P免疫组化方法检测转染的NIH3T3细胞中HCV NS3蛋白表达,并通过端粒酶活性原位检测法、TRAP-PCR和端粒酶PCR ELISA技术分别检测转染前后NIH3T3细胞端粒酶活性的变化.结果 HCV NS3表达质粒pRcHCNS3-5＇或pRcHCNS3-3＇转染的NIH3T3细胞均表达HCV NS3蛋白,HCV NS3蛋白阳性信号均位于细胞浆中,并以前者表达的阳性信号为强;质粒pRcHCNS3-5＇转染的NIH3T3细胞端粒酶活性最强(P<0.01),质粒pRcHCNS3-3＇转染的细胞次之(P<0.05),空白质粒pRcCMV转染细胞和未转染NIH3T3细胞最弱(P<0.05);HCV NS3蛋白的表达水平和端粒酶活性强度之间具有显著相关性(P<0.01);采用端粒酶活性原位检测方法和端粒酶PCR ELISA技术检测结果具有较好的一致性.结论 HCV NS3蛋白可能是通过内源性机制激活细胞端粒酶导致宿主细胞恶性转化; HCV NS3蛋白 N端多肽对宿主细胞端粒酶的激活作用强于C端多肽;进一步证实端粒酶活性原位检测法是一种适合于病理形态与功能研究的有效技术.