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摘要：目的：通过观察姜黄对RA患者关节成纤维样滑膜细胞的作用，利用蛋白质组学手段，找出姜黄作用于RA患者关节成纤维样滑膜细胞差异蛋白的表达。方法：实验研究方法包括中药提取分离法、高效液相色谱法、蛋白质组学法等技术及多元统计分析方法。结果：成功鉴定出6个具有明显差异的蛋白，见表1。结论：差异蛋白的功能与滑膜细胞的增殖、凋亡、代谢等有着或多或少的联系，需要采用转基因或蛋白试剂干预实验对其进行验证。
2012年广州市中医药中西医结合科研课题（20122A011013）
姜黄作为一味传统中草药，在治疗中医痹证方面已有悠久的临床应用历史并予以详细的记载。如《本草述》云：“治气证痞证，胀满喘噎，胃脘痛，腹胁肩背及臂痛，痹，疝。”《本草纲目》曰：“治风痹臂痛。”
本研究应用姜黄不同溶剂提取物作用于 RA 患者关节成纤维样滑膜细胞，利用蛋白质组学手段，找出姜黄不同溶剂提取物对 RA 患者关节成纤维样滑膜细胞影响的差异蛋白表达。
1. 材料与方法
1.1样品制备：受试药物配制：少量DMSO溶解姜黄素（美国sigma公司），配成20mg/ml溶液，-20℃保存。水提取物（A液）：取姜黄100g，粉碎，50-60目过筛，用水（1L）回流提取2h，药液冷却至室温，于1200g离心15min，过滤后冻干，得到姜黄水提取物A。含量测定：采用高效液相色谱法进行各提取物的含量测定。体外试验时，水提取物以水助溶，醇提取物以DMSO助溶，不完全培养基配成10mmol/l母液，微孔滤膜过滤除菌，临用前用不完全培养基稀释。
1.2成纤维样滑膜细胞的处理：取培养至第四代的原代成纤维样滑膜细胞，分别制备含有不同浓度药物含量的细胞悬液，接种于96孔板中，使细胞悬液中姜黄提取部位的终浓度分别为100mg/l， 72h后收集细胞上清，-20℃冰箱保存待测。具体分组如下：（1）A组：RA患者成纤维样滑膜细胞组； （2） B组：RA患者成纤维样滑膜细胞+姜黄素（100mg/l）。
1.3蛋白质提取及鉴定
采用常规方法对姜黄不同溶剂提取物作用于RA患者关节成纤维样滑膜细胞进行双向凝胶电泳分离蛋白、银染，PD-Quest图像分析，选择、切取蛋白点原位酶解得到肽混合物，经过LCQ-MS-MS分析得到肽质纹谱，肽序列标签。
3. 讨论
姜黄主要含有挥发油类和姜黄素类成分，其药理活性主要表现在抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗凝血[1]等方面。最近，国外研究者从姜黄作为咖喱和很多其他食物的调味品数世纪来被作为印度中药医师作为治疗炎症紊乱药物这一启示，开始关注姜黄在治疗关节炎方面的作用并开展了相关研究，初步证实姜黄能预防关节炎和骨质疏松[3]。研究发现姜黄、乳香、亚麻仁油等提取物对减轻患者关节疼痛等症状有一定的治疗作用。日本学者对姜黄属中药姜黄、莪术及日本的姜黄属药物gajutsu及haruukon的抗炎作用进行了对照研究，发现以上药物均有较强的抗炎作用，具体有效成分和作用机制有待研究[4]。姜黄的主要有效成分姜黄素具有抗血管生成作用，能够抑制多种细胞株的细胞增殖和诱导细胞凋亡[5]。
本研究通过蛋白质组学实验，成功鉴定出6个具有明显差异的蛋白，这6个蛋白的功能与滑膜细胞的增殖、凋亡、代谢等有着或多或少的联系，需要采用转基因或蛋白试剂干预实验对其进行验证。目前治疗 RA 药物和方法虽然很多，但至今仍无一定针对性或特殊疗法，在某种程度上可以说还是探索性的，医学界也一直在积极寻求防治RA 的有效药物，鉴于很多化学药物存在的危险因素和有限性，越来越多的目光集中到应用替代治疗法如针刺、植物药等治疗RA。而姜黄作为一味传统中草药，临床应用安全有效，在预防和治疗中医痹证方面有着悠久的历史和丰富的经验，但具体机制仍需进一步确认。
参考文献：
[1]Banerjee M， Tripathi LM， Srivastava VM， Puri A， Shukla R.Modulation of inflammatory mediators by ibuprofen and curcumin treatment during chronic inflammation in rat immunopharmacol immunotoxicol 2003；25；213-224.
[2]Pan MH， Lin-Shiau SY， Lin JK. Comparative studies on the suppression of nitric oxide synthase by curcumin and its hydrogenated metabolites through down-regulation of INB kinase and NF-B activation in macrophages Biochem Pharmacol 2000；60：1665-1676.
[3]Lim GP， Chu T， Yang F， Beech W， Frautschy SA， Cole GM.The curry spice curcumin reduces oxidative damage and amyloid pathology in an Alzheimer transgenic mouse J Neurosci 2001；21：8370-8377.
[4]Sasaki Y，Goto H， Tohda C， Hatanaka F， Shibahara N， Shimada Y，et al. Effects of curcuma drugs on vasomotion in isolated rat aorta Boil pharm bull 2003；26；1135-1143.
2012年广州市中医药中西医结合科研课题（20122A011013）
姜黄作为一味传统中草药，在治疗中医痹证方面已有悠久的临床应用历史并予以详细的记载。如《本草述》云：“治气证痞证，胀满喘噎，胃脘痛，腹胁肩背及臂痛，痹，疝。”《本草纲目》曰：“治风痹臂痛。”
本研究应用姜黄不同溶剂提取物作用于 RA 患者关节成纤维样滑膜细胞，利用蛋白质组学手段，找出姜黄不同溶剂提取物对 RA 患者关节成纤维样滑膜细胞影响的差异蛋白表达。
1. 材料与方法
1.1样品制备：受试药物配制：少量DMSO溶解姜黄素（美国sigma公司），配成20mg/ml溶液，-20℃保存。水提取物（A液）：取姜黄100g，粉碎，50-60目过筛，用水（1L）回流提取2h，药液冷却至室温，于1200g离心15min，过滤后冻干，得到姜黄水提取物A。含量测定：采用高效液相色谱法进行各提取物的含量测定。体外试验时，水提取物以水助溶，醇提取物以DMSO助溶，不完全培养基配成10mmol/l母液，微孔滤膜过滤除菌，临用前用不完全培养基稀释。
1.2成纤维样滑膜细胞的处理：取培养至第四代的原代成纤维样滑膜细胞，分别制备含有不同浓度药物含量的细胞悬液，接种于96孔板中，使细胞悬液中姜黄提取部位的终浓度分别为100mg/l， 72h后收集细胞上清，-20℃冰箱保存待测。具体分组如下：（1）A组：RA患者成纤维样滑膜细胞组； （2） B组：RA患者成纤维样滑膜细胞+姜黄素（100mg/l）。
1.3蛋白质提取及鉴定
采用常规方法对姜黄不同溶剂提取物作用于RA患者关节成纤维样滑膜细胞进行双向凝胶电泳分离蛋白、银染，PD-Quest图像分析，选择、切取蛋白点原位酶解得到肽混合物，经过LCQ-MS-MS分析得到肽质纹谱，肽序列标签。
3. 讨论
姜黄主要含有挥发油类和姜黄素类成分，其药理活性主要表现在抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗凝血[1]等方面。最近，国外研究者从姜黄作为咖喱和很多其他食物的调味品数世纪来被作为印度中药医师作为治疗炎症紊乱药物这一启示，开始关注姜黄在治疗关节炎方面的作用并开展了相关研究，初步证实姜黄能预防关节炎和骨质疏松[3]。研究发现姜黄、乳香、亚麻仁油等提取物对减轻患者关节疼痛等症状有一定的治疗作用。日本学者对姜黄属中药姜黄、莪术及日本的姜黄属药物gajutsu及haruukon的抗炎作用进行了对照研究，发现以上药物均有较强的抗炎作用，具体有效成分和作用机制有待研究[4]。姜黄的主要有效成分姜黄素具有抗血管生成作用，能够抑制多种细胞株的细胞增殖和诱导细胞凋亡[5]。
本研究通过蛋白质组学实验，成功鉴定出6个具有明显差异的蛋白，这6个蛋白的功能与滑膜细胞的增殖、凋亡、代谢等有着或多或少的联系，需要采用转基因或蛋白试剂干预实验对其进行验证。目前治疗 RA 药物和方法虽然很多，但至今仍无一定针对性或特殊疗法，在某种程度上可以说还是探索性的，医学界也一直在积极寻求防治RA 的有效药物，鉴于很多化学药物存在的危险因素和有限性，越来越多的目光集中到应用替代治疗法如针刺、植物药等治疗RA。而姜黄作为一味传统中草药，临床应用安全有效，在预防和治疗中医痹证方面有着悠久的历史和丰富的经验，但具体机制仍需进一步确认。
参考文献：
[1]Banerjee M， Tripathi LM， Srivastava VM， Puri A， Shukla R.Modulation of inflammatory mediators by ibuprofen and curcumin treatment during chronic inflammation in rat immunopharmacol immunotoxicol 2003；25；213-224.
[2]Pan MH， Lin-Shiau SY， Lin JK. Comparative studies on the suppression of nitric oxide synthase by curcumin and its hydrogenated metabolites through down-regulation of INB kinase and NF-B activation in macrophages Biochem Pharmacol 2000；60：1665-1676.
[3]Lim GP， Chu T， Yang F， Beech W， Frautschy SA， Cole GM.The curry spice curcumin reduces oxidative damage and amyloid pathology in an Alzheimer transgenic mouse J Neurosci 2001；21：8370-8377.
[4]Sasaki Y，Goto H， Tohda C， Hatanaka F， Shibahara N， Shimada Y，et al. Effects of curcuma drugs on vasomotion in isolated rat aorta Boil pharm bull 2003；26；1135-1143.