目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测大鼠血浆内新利司他杂质A（2-[[（十六烷氧基）羰基]氨基]-5-甲基苯甲酸）含量的方法以及该方法在药代动力学中的应用。方法:大鼠含药血浆以奥利司他为内标，用乙腈沉淀蛋白，10 000 r·min-1离心10 min,吸取上清液150μL,加入四氢呋喃10μL,混匀后进样分析。采用Hypersil GOLD（50 mm×2.1 mm, 1.9μm）色谱柱，以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水（82∶18）为流动相，流速为0.5 mL·min-1,柱温为30℃;质量检测器使用ESI离子源，正离子模式检测，待测物杂质A及内标奥利司他用于定量的母→子离子对分别为m/z 420.3→160.3、m/z 496.4→319.3。结果:新利司他杂质A质量浓度在0.020 0～10.0 mg·L-1范围内呈良好的线性关系。稳定性、准确度的RE均在0.1%～6.3%范围内，精密度、回收率、基质效应的RSD均在3.8%以下。在大鼠灌胃低(20 mg·kg-1)、中(80 mg·kg-1)、高(320 mg·kg-1)3个剂量新利司他杂质A混悬液的药代动力学实验中，血浆中新利司他杂质A的最高血药浓度(Cmax)仅为12.1 mg·L-1,3个剂量组的AUC分别为22.2、64.9、85.0 mg·L-1·h;血浆暴露量虽随剂量增加而增加，但是增加倍数小于剂量增加倍数。3个剂量组的达峰时间(Tmax)在2.6～3.0 h,消除半衰期(t1/2z)在3.08～3.85 h,吸收、消除过程类似。结论:本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆内新利司他杂质A含量的方法。大鼠灌胃新利司他杂质A混悬液，在20～320 mg·kg-1剂量范围内吸收入血的量比较少，血浆暴露量小于剂量相关线性增加，口服带来的安全性问题有限。