【摘 要】
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目的 体外研究外源Rac1基因表达对HT1080纤维肉瘤细胞侵袭胶原蛋白屏障的影响及其机制.方法 将转染显性负调控突变体Rac1V12N17(HN)、持续活化型Rac1V12(HV)或空载体(HW)纤维肉瘤HT1080细胞,在含胶原蛋白凝胶三维基质中培养,用得克萨斯红结合的鬼笔环肽染色显示细胞肌动蛋白骨架结构.用胶原蛋白凝胶薄膜覆盖滤膜的Transwell小室进行细胞侵袭胶原屏障实验,并观察2种蛋
【机 构】
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南京大学医学院附属鼓楼医院消化科,116013,大连医科大学病理教研室,116013,大连医科大学病理教研室
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目的 体外研究外源Rac1基因表达对HT1080纤维肉瘤细胞侵袭胶原蛋白屏障的影响及其机制.方法 将转染显性负调控突变体Rac1V12N17(HN)、持续活化型Rac1V12(HV)或空载体(HW)纤维肉瘤HT1080细胞,在含胶原蛋白凝胶三维基质中培养,用得克萨斯红结合的鬼笔环肽染色显示细胞肌动蛋白骨架结构.用胶原蛋白凝胶薄膜覆盖滤膜的Transwell小室进行细胞侵袭胶原屏障实验,并观察2种蛋白酶抑制剂对上述细胞侵袭实验的影响.采用明胶酶谱法检测在三维基质中培养的上述转染细胞分泌型基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达和活化.结果 胶原蛋白凝胶中培养的HV和HN细胞在形态上表现出明显差异,前者有更多伪足样突起;HV细胞侵袭胶原屏障能力大于HW细胞,而后者又强于HN细胞,这种差别在应用广谱MMP抑制剂后消失,而抑肽酶则无影响;外源Rac1的表达促进胶原和纤维蛋白基质中培养的HT1080纤维肉瘤细胞分泌型MMP-2的表达和活化.结论 外源持续活化型Rac1基因在纤维肉瘤HT1080细胞内稳定表达,可诱导细胞内肌动蛋白聚集,增强细胞侵袭胶原屏障能力.Rac1表达促进MMP-2活化可能是其重要机制之一。
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