人脐血CD133+血管内皮祖细胞的培养、鉴定与分化研究

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目的 探讨从人脐血中分离、体外培养CD133+血管内皮祖细胞(EPCs)的方法及其生长特性和鉴定.方法 采用密度梯度离心法结合MACS分选法提取人脐血中CD133+细胞,进行流式细胞仪检测纯度,予EBM-2培养液接种培养,观察其生长特性;利用Dil-LDL及FITC-Lectin摄取实验、细胞免疫组织化学等进行鉴定.结果 经流式细胞仪检测CD133+细胞平均占单核细胞的(1.13±0.10)%,磁珠分选所得CD133+细胞平均纯度为(91.45±1.04)%;CD133+细胞贴壁生长,可分化为梭形血管内皮细胞及形成集落;CD133+细胞培养过程中Dil-LDL及FITC-Lectin摄取阳性,双染阳性率为(95.83±1.72)%;CD133+细胞培养1周后经免疫组织化学检测CD34、Ⅷ因子阳性率分别为(95.83±2.23)%和(95.92±1.43)%,与人脐静脉内皮细胞比较差异无统计学意义;CD133+细胞体外培养4 d、1周可形成小血管结构.结论 免疫磁珠分选法可获取较高纯度CD133+血管内皮祖细胞,在生长因子作用下诱导其分化为成熟血管内皮细胞.
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