【摘 要】
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目的 定量分析新型冠状病毒核酸检测过程中的灵敏度损失,为改进检测流程、解决假阴性问题提供支持.方法 以N基因假病毒为样本,对核酸提取方法、保存液pH、保存液体积、提取核
【机 构】
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山东大学微生物技术国家重点实验室,山东 青岛266000;山东仕达思生物产业有限公司,山东 济南250000
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目的 定量分析新型冠状病毒核酸检测过程中的灵敏度损失,为改进检测流程、解决假阴性问题提供支持.方法 以N基因假病毒为样本,对核酸提取方法、保存液pH、保存液体积、提取核酸所用的样本保存液体积中可能影响诊断灵敏度的各种因素进行系统的定量分析和优化,并对优化的检测方法与目前常规检测法进行比较.结果 用柱法提取核酸,使用酸性样本保存液可提高检测灵敏度;随着保存液体积增大,假病毒释放得更充分,当保存液体积达到3 mL时假病毒接近完全洗脱;分别取200μL和3 mL保存液样本提取核酸,检测灵敏度相差10倍以上;全部保存液样本用离心柱法提取核酸且PCR体系中加入12μL模板时,检测灵敏度达70 copies/mL;取200μL样本提取核酸且PCR体系中加入4μL模板时,灵敏度为700 copies/mL.结论 将新型冠状病毒标本存放于偏酸性样本保存液中,利用尽量多的样本保存液,用离心柱法提取核酸,并在PCR体系中加入最大量的模板,该操作法可较目前常规检测法将最终检测灵敏度提高10倍以上.
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