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以红三叶(Trifoliumpratense)野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在MB-1至MB-9的固体培养基上诱导愈伤组织,筛选出最佳培养基是MB-9培养基.以白三叶(Trifoliumrepense)裁培品种“路易斯安娜”和“Huca”的叶片为外植体,接种在MB-9固体培养基上诱导愈伤组织.愈伤组织形成以后,均在MB-9固体培养上继代培养3~4次后,获得胚性愈伤组织,然后转至MB+3mg/L2,4-D+07mg/LBA+02mg/LNAA+2mg/L甘氨酸+500mg/LCH+3%蔗糖的液体培养