【摘 要】
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为了建立一种快速、特异、敏感的RHDV抗体检测方法,对VP60蛋白基因的抗原表位区域进行分析,截取VP60-1、VP60-2、VP60-3、VP60-semi1和VP60-semi2,大肠杆菌表达后纯化获得重
【机 构】
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山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600;安徽省动物疫病预防与控制中心,安徽合肥230061;滨州市畜牧兽医管理服务中心,山东滨州256600;锦州医科大学畜牧兽医学院,辽宁锦州121000;西
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为了建立一种快速、特异、敏感的RHDV抗体检测方法,对VP60蛋白基因的抗原表位区域进行分析,截取VP60-1、VP60-2、VP60-3、VP60-semi1和VP60-semi2,大肠杆菌表达后纯化获得重组截短蛋白.经抗原、抗体结合反应比较,以VP60-semi1为包被抗原检测效果最好,并建立了基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法.经优化,该方法的最佳条件:抗原包被质量浓度为0.1 μg/孔,4℃包被过夜;5％脱脂奶粉37℃封闭1 h;血清稀释度为1 ∶ 200,37℃孵育1 h;最后37℃作用显色15 min.该方法与血凝抑制(HI)检测相比,敏感性好,阳性血清稀释至1 ∶ 6 400仍可检出;批内、批间变异系数分别为0.46％～4.97％和2.68％～8.88％,重复性好;符合率检测显示,与HI法的符合率为89.29％,与免疫保护试验结果符合率为100％.结果表明,建立了一种基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法,可用于监测兔群免疫后抗体水平动态并指导疫苗免疫,以及该病的流行病学调查等.
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