含有WW结构域的氧化还原酶的基因在骨肉瘤化疗中的作用

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zuizui8321
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目的 探讨外源性含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX基因)转染骨肉瘤细胞株MG63后对化疗药物的增敏作用和化疗后WWOX基因的表达.方法 用慢病毒转染法将WWOX重组真核表达质粒及空载质粒转染至MG-63细胞,分别建立稳定表达WWOX基因的MG63-WWOX过表达细胞株(WWOX-OE)及空载质粒细胞株(CON),然后细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞的增殖,膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)和碘化丙锭(PI)双染法检测各组细胞的凋亡;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组WWOX基因的mRNA和蛋白水平的表达.结果 WWOX-OE组与CON组在加入化疗药物(顺铂+多西他赛)处理后,结果显示WWOX-OE组与CON组比较增殖明显受抑制(24 h:2.595±0.088比2.658±0.132,P>0.05;48 h:0.425±0.052比0.820 ±0.117,P <0.05;72 h:0.265±0.016比0.594±0.034,P<0.05;96 h:0.112±0.011比0.265±0.016,P<0.05),凋亡明显增多(29.500±2.450比17.460±1.561,P<0.05).RT-PCR和Western blot法结果显示化疗药处理后的WWOX-OE组与CON组WWOX的表达均明显增高(RT-PCR结果:WWOX-OE组:51.29±10.20比259.90±36.33,P<0.05;CON组:5.70±2.18比36.76±3.71,P<0.05).且RT-PCR结果显示化疗药处理后的WWOX-OE组较CON组WWOX的表达量更高(259.90±36.33比36.76±3.71,P< 0.05).结论 在骨肉瘤细胞MG63中,上调WWOX基因的表达可以增加化疗的敏感性,这也为研究骨肉瘤化疗不敏感及耐药提供了新的思路.
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