人鼻咽癌组织定向cDNA文库的构建

来源 :中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wing001019
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目的快速构建成人鼻咽癌组织cDNA文库.方法从人鼻咽癌组织分离总RNA,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第一链cDNA,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA,双链cDNA经sfiI(IA & IB)酶切,以CHROMA SPIN-400柱分级分离cDNA,收集符合需要的cDNA片段并纯化,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库.结果经检测共获得 3.64×106个重组子,重组率>94%,文库经扩增后
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