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【摘 要】 目的：建立比色法测定岗梅根中总皂苷含量，为岗梅根的质量控制提供依据。 方法：以人参皂苷Re为对照品、香草醛-高氯酸为显色剂，在545 nm波长下测定。 结果：对照品在皂苷质量为0.0624 mg至0.1664 mg的范围内呈良好的线性关系，加样回收试验与精密度的RSD分别为1.83%与0.76%，方法学验证的各项指标均符合要求。5批岗梅根总皂苷平均含量分别为2.93%、2.87%、2.21%、2.34%、1.93%。结论：方法简便、准确，稳定性、重复性好，可以作为岗梅根及其制剂质量检测方法之一。
【关键词】 比色法;岗梅根;总皂苷
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）15-0047-03
Abstract： ObjectiveTo establish a colorimetric analysis method for the quantitative determination of total saponins in Radix Ilicis Asprellae （RIA）. Methods The ginsenoside Re was used as the reference substance and Vanillin- perchloric acid was taken as the chromogenic agent， detected at the wavelength of 545 nm. Results The reference substance showed a good linear relationship at a range of 0.0624 mg to 0.1664 mg. The RSD of the recoveries and precision were 1.83% and 0.76%. All the indexes of the methodological investigations meet the requirements. Conclusion The method is simple and accurate. It may be used for quality control of RIA and its preparations.
Keywords：Colorimetric Analysis; Radix Ilicis Asprellae; Total Saponins
岗梅为冬青科植物梅叶冬青Ilex asprella （Hook. et Arn.） Champ. ex Benth. 的干燥根。全年均可采挖，主产于广东、广西[1]。本品性味苦寒，有清热解毒、生津活血的功效，主治热病、燥渴、热泻、咳血、喉痛等症[2]。据广东韶关地区药检所[3]113抗菌试验表明，岗梅根对乙型溶血性链球菌有轻度抑制作用，对离体豚鼠心脏注射本品，发现冠脉流量和心收缩力有所增加。在临床上也有岗梅根用于防治各类感染的报道[4]。据麦海燕等[5]对岗梅制剂的体外抗菌試验表明，其对上呼吸道感染常见致病菌有较好的抑菌作用。岗梅是常用的凉茶原料，常与其他清热凉血的药材配伍制成合剂使用，如著名的成药王老吉、六合茶均以岗梅作为主要成分。
岗梅根中含有三萜皂苷（其中包括对-香豆酰三萜类[6]、齐敦果酸和熊果酸[7]）、内酯、生物碱、氨基酸、赪酮甾醇、赪酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素-O-β-D葡萄糖苷和19-去氢乌索酸等[8]，其中皂苷类物质可能为本品药理作用的基础。而对于岗梅总皂苷的测定方法和结果，目前仅见冯达星等[9]以大孔树脂富集纯化岗梅根总皂苷。文中采取比色法作为测定方法，对岗梅根药材的总皂苷进行含量测定。
1 TU-1810紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产;电子恒温水浴锅，汕头市医用设备厂生产; OFY-500药材粉碎机，温岭市大德中药机械有限公司生产;AG285电子分析天平，Mettler toledo公司生产。人参皂苷Re，购自中国药品生物制品检定所，批号为110754-200320。试剂均为分析纯。
岗梅根为广州的零售药店收集，产地见表1。
将岗梅根用中药粉碎机打碎至粉末状，于阴凉处封装保存，供含量测定用。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Re 对照品5.2 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制得对照品溶液，浓度为0.2080 mg/mL。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取岗梅根粉末约1g，用滤纸包裹，置于索氏提取器中，用20 mL甲醇冷浸过夜。将甲醇浸泡液引流入圆底烧瓶中并补加50 mL新鲜甲醇，回流4 h。合并提取器和圆底烧瓶中的甲醇液，转移至蒸发皿，水浴蒸干。残渣用15 mL蒸馏水分3次溶解并转移至分液漏斗。用水饱和正丁醇萃取4次，每次30 mL。合并4次正丁醇萃取液，转移至蒸发皿，水浴蒸干。残渣用甲醇溶解并定容至50 mL，制得供试品溶液。
2.3 测定方法 精密量取0.3 mL供试品溶液，置于60 ℃水浴加热并吹干溶剂。加入0.2 mL的5%香草醛-冰醋酸溶液（新鲜配制）和0.8 mL高氯酸，盖塞摇匀，置于60 ℃水浴加热15 min。取出试管并立即用冰水浴冷却，加入5 mL冰醋酸稀释，摇匀。自冰水浴冷却算起30 min后上机测量吸光度，以545 nm作为检测波长。每次测量并行空白，自“吹干溶剂”后平行操作。
2.4 吸收光谱的测定 取一定量的对照品溶液及按照2.2的方法制备的供试品溶液，按照2.3节的方法显色，于400～700 nm进行光谱扫描。结果对照品溶液与供试品溶液均在545 nm波长处有最大吸收，故确定测定波长为545 nm。 2.5 方法学验证
2.5.1 标准曲线的制备 按照最佳吸光度区间设计样品浓度区间，取6个浓度点制作标准曲线。准确吸取对照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，以吸光度为横坐标、皂苷加入质量为纵坐标作图，并计算回归方程。其结果如图2所示。
2.5.3 精密度试验 取编号D的岗梅根粉末，精密称取6份，每份约1 g，按2.2节的方法制备，每份取样0.3 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度。测量结果如表3所示。
按表3结果计算，该批次6份样品的皂苷含量平均值为2.34%，RSD为0.76%。说明用此法测定岗梅根总皂苷的含量精密度高，完全能满足样品分析的要求。
3 结果
药材的测定 准确吸取供试品溶液0.3 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，测定总皂苷的含量。结果见表4。
4 讨论与结论
4.1 香草醛-高氯酸是常用的皂苷显色反应体系。以此作为比色法的基础，以人参皂苷Re、黄芪甲苷等稳定的标准物质作为对照品，在同类分析研究中均已建立起成熟、稳定的紫外测定方法，该法在百合[10]、酸枣仁[11]、甘草[12]、屏边三七[13]等药材的总皂苷含量测定中均得到深入的研究与应用。
4.2 实验探索了加热时间、加热温度、检测波长和检测时间等4个对显色测定影响较大的因素。最后选定显色反应条件和检测条件为60℃加热15 min、在545 nm下测定吸光度，放置30 min后测定，即如2.3节所述方法，在此法下方法学验证的稳定性、重复性最好。
岗梅有明确的药理活性，在广东地区作为凉茶的主要原料已使用了几百年。然而，岗梅并未收载到《中国药典》（2015 年版）等国家药品质量标准中，现行的质量标准为地方标准《广东省中药材质量标准》（第一册）（2004 年版），此标准仅有性状、鉴别、检查项，并无含量测定内容[3]111。比色法测定岗梅根总皂苷含量，结果良好，方法学验证数据符合要求，可作为岗梅有效部位含量测定的补充。通过进一步研究，将此法扩展到岗梅根的相关制剂的总皂苷的测定中，为岗梅根及相关制剂的质量控制提供更多有价值的方法与成果。
参考文献
[1]广东中药志编委会. 广东中药志[M]. 广东：广东科技出版社，1994：149.
[2]蔡杰，蔡静月，黄健华. 清热利咽颗粒的制备及临床应用[J]. 河北医学，2007（7）：817-819.
[3]广东省食品药品监督管理局. 广东省中药材质量标准（第一册）[M]. 广东：广东科技出版社，2004：111.
[4]范文昌，梅全喜，李楚源. 广东地产清热解毒药物大全[M]. 北京：中医古籍出版社，2011：332.
[5]麦海燕，黄际薇，肖佩玉，等. 岗梅感冒灵颗粒体外抗菌作用[J]. 中国实用医药，2007，7（18）：52
[6]孙备. 从岗梅中分离出新的抗肿瘤药物—对-香豆酰三萜类[J]. 中草药，1995（3）：124.
[7]莫结丽，贾宜军，邓六勤，等. 蓝梅颗粒质量标准研究[J]. 中药材，2005（9）：90-91.
[8]杜冰曌，杨鑫瑶，冯晓，等. 岗梅的化学成分和药理作用研究进展[J]. 中国中药杂志，2017，42（1） ：20-28.
[9]冯达星，余楚钦，钟鸣. 大孔树脂富集纯化岗梅根中总皂苷的研究[J]. 广东药学院学报，2004（3）：218-220.[Z [10]吉宏武，丁霄霖. 百合总皂苷定量测定方法的研究[J]. 林产化学与工业，2003（4）：54-58.
[11]高声传，郭涛，夏维杰，等. 比色法测定酸棗仁提取物中总皂苷的含量[J]. 实用药物与临床，2005（1）：15-16.
[12]兰霞，王洪新. 比色法测定甘草中总皂苷的含量[J]. 时珍国医国药，2007（4）：886-887.
[13]李莉，刘勇，张美.屏边三七总皂苷的含量测定研究[J].中国民族民间医药，2017，26（24） ：22-26.
（收稿日期：2020-04-13 编辑：刘斌）
【关键词】 比色法;岗梅根;总皂苷
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）15-0047-03
Abstract： ObjectiveTo establish a colorimetric analysis method for the quantitative determination of total saponins in Radix Ilicis Asprellae （RIA）. Methods The ginsenoside Re was used as the reference substance and Vanillin- perchloric acid was taken as the chromogenic agent， detected at the wavelength of 545 nm. Results The reference substance showed a good linear relationship at a range of 0.0624 mg to 0.1664 mg. The RSD of the recoveries and precision were 1.83% and 0.76%. All the indexes of the methodological investigations meet the requirements. Conclusion The method is simple and accurate. It may be used for quality control of RIA and its preparations.
Keywords：Colorimetric Analysis; Radix Ilicis Asprellae; Total Saponins
岗梅为冬青科植物梅叶冬青Ilex asprella （Hook. et Arn.） Champ. ex Benth. 的干燥根。全年均可采挖，主产于广东、广西[1]。本品性味苦寒，有清热解毒、生津活血的功效，主治热病、燥渴、热泻、咳血、喉痛等症[2]。据广东韶关地区药检所[3]113抗菌试验表明，岗梅根对乙型溶血性链球菌有轻度抑制作用，对离体豚鼠心脏注射本品，发现冠脉流量和心收缩力有所增加。在临床上也有岗梅根用于防治各类感染的报道[4]。据麦海燕等[5]对岗梅制剂的体外抗菌試验表明，其对上呼吸道感染常见致病菌有较好的抑菌作用。岗梅是常用的凉茶原料，常与其他清热凉血的药材配伍制成合剂使用，如著名的成药王老吉、六合茶均以岗梅作为主要成分。
岗梅根中含有三萜皂苷（其中包括对-香豆酰三萜类[6]、齐敦果酸和熊果酸[7]）、内酯、生物碱、氨基酸、赪酮甾醇、赪酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素-O-β-D葡萄糖苷和19-去氢乌索酸等[8]，其中皂苷类物质可能为本品药理作用的基础。而对于岗梅总皂苷的测定方法和结果，目前仅见冯达星等[9]以大孔树脂富集纯化岗梅根总皂苷。文中采取比色法作为测定方法，对岗梅根药材的总皂苷进行含量测定。
1 TU-1810紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产;电子恒温水浴锅，汕头市医用设备厂生产; OFY-500药材粉碎机，温岭市大德中药机械有限公司生产;AG285电子分析天平，Mettler toledo公司生产。人参皂苷Re，购自中国药品生物制品检定所，批号为110754-200320。试剂均为分析纯。
岗梅根为广州的零售药店收集，产地见表1。
将岗梅根用中药粉碎机打碎至粉末状，于阴凉处封装保存，供含量测定用。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Re 对照品5.2 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制得对照品溶液，浓度为0.2080 mg/mL。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取岗梅根粉末约1g，用滤纸包裹，置于索氏提取器中，用20 mL甲醇冷浸过夜。将甲醇浸泡液引流入圆底烧瓶中并补加50 mL新鲜甲醇，回流4 h。合并提取器和圆底烧瓶中的甲醇液，转移至蒸发皿，水浴蒸干。残渣用15 mL蒸馏水分3次溶解并转移至分液漏斗。用水饱和正丁醇萃取4次，每次30 mL。合并4次正丁醇萃取液，转移至蒸发皿，水浴蒸干。残渣用甲醇溶解并定容至50 mL，制得供试品溶液。
2.3 测定方法 精密量取0.3 mL供试品溶液，置于60 ℃水浴加热并吹干溶剂。加入0.2 mL的5%香草醛-冰醋酸溶液（新鲜配制）和0.8 mL高氯酸，盖塞摇匀，置于60 ℃水浴加热15 min。取出试管并立即用冰水浴冷却，加入5 mL冰醋酸稀释，摇匀。自冰水浴冷却算起30 min后上机测量吸光度，以545 nm作为检测波长。每次测量并行空白，自“吹干溶剂”后平行操作。
2.4 吸收光谱的测定 取一定量的对照品溶液及按照2.2的方法制备的供试品溶液，按照2.3节的方法显色，于400～700 nm进行光谱扫描。结果对照品溶液与供试品溶液均在545 nm波长处有最大吸收，故确定测定波长为545 nm。 2.5 方法学验证
2.5.1 标准曲线的制备 按照最佳吸光度区间设计样品浓度区间，取6个浓度点制作标准曲线。准确吸取对照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，以吸光度为横坐标、皂苷加入质量为纵坐标作图，并计算回归方程。其结果如图2所示。
2.5.3 精密度试验 取编号D的岗梅根粉末，精密称取6份，每份约1 g，按2.2节的方法制备，每份取样0.3 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度。测量结果如表3所示。
按表3结果计算，该批次6份样品的皂苷含量平均值为2.34%，RSD为0.76%。说明用此法测定岗梅根总皂苷的含量精密度高，完全能满足样品分析的要求。
3 结果
药材的测定 准确吸取供试品溶液0.3 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，测定总皂苷的含量。结果见表4。
4 讨论与结论
4.1 香草醛-高氯酸是常用的皂苷显色反应体系。以此作为比色法的基础，以人参皂苷Re、黄芪甲苷等稳定的标准物质作为对照品，在同类分析研究中均已建立起成熟、稳定的紫外测定方法，该法在百合[10]、酸枣仁[11]、甘草[12]、屏边三七[13]等药材的总皂苷含量测定中均得到深入的研究与应用。
4.2 实验探索了加热时间、加热温度、检测波长和检测时间等4个对显色测定影响较大的因素。最后选定显色反应条件和检测条件为60℃加热15 min、在545 nm下测定吸光度，放置30 min后测定，即如2.3节所述方法，在此法下方法学验证的稳定性、重复性最好。
岗梅有明确的药理活性，在广东地区作为凉茶的主要原料已使用了几百年。然而，岗梅并未收载到《中国药典》（2015 年版）等国家药品质量标准中，现行的质量标准为地方标准《广东省中药材质量标准》（第一册）（2004 年版），此标准仅有性状、鉴别、检查项，并无含量测定内容[3]111。比色法测定岗梅根总皂苷含量，结果良好，方法学验证数据符合要求，可作为岗梅有效部位含量测定的补充。通过进一步研究，将此法扩展到岗梅根的相关制剂的总皂苷的测定中，为岗梅根及相关制剂的质量控制提供更多有价值的方法与成果。
参考文献
[1]广东中药志编委会. 广东中药志[M]. 广东：广东科技出版社，1994：149.
[2]蔡杰，蔡静月，黄健华. 清热利咽颗粒的制备及临床应用[J]. 河北医学，2007（7）：817-819.
[3]广东省食品药品监督管理局. 广东省中药材质量标准（第一册）[M]. 广东：广东科技出版社，2004：111.
[4]范文昌，梅全喜，李楚源. 广东地产清热解毒药物大全[M]. 北京：中医古籍出版社，2011：332.
[5]麦海燕，黄际薇，肖佩玉，等. 岗梅感冒灵颗粒体外抗菌作用[J]. 中国实用医药，2007，7（18）：52
[6]孙备. 从岗梅中分离出新的抗肿瘤药物—对-香豆酰三萜类[J]. 中草药，1995（3）：124.
[7]莫结丽，贾宜军，邓六勤，等. 蓝梅颗粒质量标准研究[J]. 中药材，2005（9）：90-91.
[8]杜冰曌，杨鑫瑶，冯晓，等. 岗梅的化学成分和药理作用研究进展[J]. 中国中药杂志，2017，42（1） ：20-28.
[9]冯达星，余楚钦，钟鸣. 大孔树脂富集纯化岗梅根中总皂苷的研究[J]. 广东药学院学报，2004（3）：218-220.[Z [10]吉宏武，丁霄霖. 百合总皂苷定量测定方法的研究[J]. 林产化学与工业，2003（4）：54-58.
[11]高声传，郭涛，夏维杰，等. 比色法测定酸棗仁提取物中总皂苷的含量[J]. 实用药物与临床，2005（1）：15-16.
[12]兰霞，王洪新. 比色法测定甘草中总皂苷的含量[J]. 时珍国医国药，2007（4）：886-887.
[13]李莉，刘勇，张美.屏边三七总皂苷的含量测定研究[J].中国民族民间医药，2017，26（24） ：22-26.
（收稿日期：2020-04-13 编辑：刘斌）