背景:骨髓间充质干细胞因其获取容易、创伤微小、具有无限扩增和多分化潜能、自体移植不存在免疫排斥反应而受到医学研究者的青睐。目的:体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,观察不同浓度补肾活血中药含药血清对其增殖的影响。设计:完全随机对照的动物实验。单位:广州中医药大学第一附属医院髋中心。材料:选用健康雄性 SD 大鼠 40 只,SPF 级,体质量 170~180 g,由广州中医药大学实验动物中心提供。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。将实验动物按随机数字表分为 4 组,正常对照组和高、中、低剂量给药组,每组 10 只。方法:实验于 2005-01/03 在广州中医药大学实验动物中心完成。采用 Percoll 密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系。高、中、低剂量给药组大鼠分别灌胃补肾活血中药 4.4,2.2 和 1.1 g/kg,分别相当临床成人用量的 20,10 和 5 倍。正常对照组灌胃纯净水。连续给药 1 周。末次给药 1 h 后,无菌条件下,腹主动脉取血 6 mL/只,2 000 r/min离心 15 min,收集血清。高、中、低剂量给药组用 10%大鼠含药血清代替 10%的牛血清,正常对照组的培养基加入 10%的血清。每天观察并记录细胞生长情况,绘制生长曲线。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞的生长状况。②HE 染色和吉姆萨染色观察骨髓间充质干细胞形态。③免疫细胞化学法检测骨髓间充质干细胞的抗原表达。④不同浓度含药血清对骨髓间充质干细胞生长情况的影响。结果:①骨髓间充质干细胞的生长状况:原代培养的骨髓细胞 24 h后开始贴壁,7 d 后可达 80%融合。②骨髓间充质干细胞的一般形态:骨髓间充质干细胞的细胞多成长梭形或多角形,细胞体积小,胞核位于胞中或稍偏,核浆比略大。③髓间充质干细胞的抗原表达:单个核细胞的胞浆中有 CD44 表达,着蓝色,部分骨髓间充质干细胞表达 c-Kit,在表型表达和细胞形态上具备骨髓间充质干细胞特征。④补肾活血中药对骨髓间充质干细胞生长曲线的影响:高、中、低剂量给药组在加入补肾活血中药血清 3 d 后,骨髓间充质干细胞数量比空白对照组明显增多,并与剂量呈正比。结论:补肾活血中药含药血清能促进骨髓间充质干细胞的体外增殖。