【摘 要】
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目的:建立一种快速、灵敏的实时荧光聚合酶链反应(PCR)对中国汉族人群的人白细胞抗原B27(HLA-B27)进行基因分型.方法:采用SYBR GreenⅠ荧光PCR法对120例已定型的标本、230例
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科
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目的:建立一种快速、灵敏的实时荧光聚合酶链反应(PCR)对中国汉族人群的人白细胞抗原B27(HLA-B27)进行基因分型.方法:采用SYBR GreenⅠ荧光PCR法对120例已定型的标本、230例健康志愿者、54例类风湿因子(RF)阳性患者和36例抗核抗体(ANA)阳性患者的HLA-B27 DNA进行实时检测,并采用熔解曲线对HLA-B27进行基因分型.结果:①熔解曲线分析显示,β珠蛋白PCR产物的Tm平均值为87.82℃,HLA-B27 PCR产物的Tm平均值为90.54℃,HLA-B27阴性标本仅在87.82℃处存在β珠蛋白的熔解曲线峰,而阳性标本则于87.82℃和90.54℃处出现两个熔解曲线峰,且ΔTm约为2.72℃;②对120个已定型的标本,SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法与传统的PCR-SSP(序列特异性引物)结果完全吻合;③健康志愿者、RF阳性患者和ANA阳性患者HLA-B27 DNA阳性率分别为2.6%(6/230)、5.7%(2/54)和5.6%(2/36).结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR法是一种快速、灵敏的HLA-B27基因分型方法,具有传统的PCR所不可比拟的优点,可取代传统的PCR法用于中国汉族人群的HLA-B27的基因分型,辅助强直性脊柱炎等脊柱关节病的诊断.
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