【摘 要】
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目的构建SEA(D227A)基因的原核表达载体,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定.方法采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因,通过下游引物上的点突变,使SEA基因第68
【基金项目】
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国家自然科学基金 (39770 82 7);全军医药卫生科研基金 (0 1Z0 84)重点资助项目
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目的构建SEA(D227A)基因的原核表达载体,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定.方法采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因,通过下游引物上的点突变,使SEA基因第680位碱基由A突变为C,致使SEA成熟蛋白的第227位氨基酸残基由天冬氨酸(GAT)突变为丙氨酸(GCT),构建pGEX-SEA(D227A)重组表达质粒,在大肠杆菌DH5α中原核表达,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定.结果构建的SEA(D227A)基因经测序证实与设计的序列一致;成功地构建pGEX-SEA(D2
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