目的 采用组织特异性启动子SM22α,构建靶向大鼠磷脂酰肌醇3激酶β亚单位(Pik3cb)的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对静脉移植血管血栓形成和新生内膜增生的影响.方法 建立大鼠颈静脉-动脉移植模型,通过Pluronic F-127质粒缓释系统在血管吻合完成后局部喷涂凝胶进行RNA干扰.实验分4组,每组30只SD大鼠,A组:对照组,空白Pluronic F-127凝胶;B组:SM22α组,含特异性SM22α启动子质粒的凝胶;C组:巨细胞病毒(CMV)组,含非特异性CMV启动子质粒的凝胶;D组:Wortmannin阳性对照组.分别于术后1、3、7、14、28 d截取移植血管,苏木素-伊红(HE)染色观察新生内膜厚度;免疫组织化学检测磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR,Ser2448),原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞捌亡.另设一平行实验组(12只SD大鼠),按上述方法分为4组,于术后3d取材,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-PCR)测定Pik3cb mRNA的相对表达量.结果 大体观察移植血管通畅率B组最高(86.7%),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);Pik3cb mRNA相对表达量B、C、D组分别下降了73.3%、81.2%、68.4%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);术后1、3、7、14、28 d,B组与A组比较,磷酸化mTOR(Ser2448)阳性面积均显著降低,细胞凋亡阳性面积均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05),术后7、14、28 d,B组与A组比较,血管内膜厚度显著降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 SM22α特异性启动子/增强子真核表达载体可通过下调血管平滑肌细胞磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B-mTOR(PI3 K-Akt-mTOR)信号通路而抑制其向内膜增殖、迁移,促进其凋亡,防止血管新生内膜增生,提高移植血管通畅率。
SM22α启动子/增强子基因调控磷酸肌醇3激酶信号通路对移植血管新生内膜增生的影响
【摘 要】
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目的 采用组织特异性启动子SM22α,构建靶向大鼠磷脂酰肌醇3激酶β亚单位(Pik3cb)的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对静脉移植血管血栓形成和新生内膜增生的影响.方法 建立大鼠颈静脉-动脉移植模型,通过Pluronic F-127质粒缓释系统在血管吻合完成后局部喷涂凝胶进行RNA干扰.实验分4组,每组30只SD大鼠,A组:对照组,空白Pluronic F-127凝胶;B组:SM
【机 构】
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030024太原,山西省心血管病医院(研究所)心血管外科,030024太原,山西省心血管病医院(研究所)心血管外科,030024太原,山西省心血管病医院(研究所)心血管外科,030024太原,山西省心
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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