雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态和分泌功能的影响

来源 :中国医学科学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qncy1239o
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目的探讨雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态、分泌功能的影响,阐明雷帕霉素引起高脂血症的可能机制。方法体外培养前脂肪细胞3T3-L1细胞株,分成对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组。用油红O染色(定性)及高效液相色谱法(定量)检测3T3-L1细胞内胆固醇水平,酶联免疫吸附实验分析瘦素、脂联素的分泌量,实时荧光定量PCR法及Western blot法检测3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白的表达。结果油红O染色显示雷帕霉素组脂肪细胞脂滴数量较对照组明显减少;对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组细胞内游离胆固醇含量分别为(12.89±0.16)、(9.84±0.45)、(9.39±0.46)和(8.61±0.34)mg/ml,与对照组相比,雷帕霉素能抑制3T3-L1前脂肪细胞内胆固醇的蓄积(P<0.05)。对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组瘦素分泌量分别为(19.02±0.52)、﹙16.98±0.01﹚、﹙15.62±0.01﹚和﹙13.84±0.66﹚ng/ml,与对照组相比,雷帕霉素能减少成熟后3T3-L1脂肪细胞瘦素的分泌水平(P<0.05)。雷帕霉素50、100及200 nmol/L组PPARγmRNA表达量分别为对照组的94%、62%和47%,均显著低于对照组(P<0.05);PPARγ蛋白表达量分别为对照组的80%、74%和61%,均显著低于对照组(P<0.05)。雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10μmol/L分别处理细胞96 h,检测PPARγmRNA的表达分别为对照组的(0.60±0.14)、(0.67±0.03)和(1.30±0.14)倍,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);PPARγ蛋白表达与mRNA的表达变化趋势相似,差异具有统计学意义(P<0.05)。雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10μmol/L分别处理细胞96 h,ELISA检测各处理组瘦素表达量分别为(19.02±0.52)、(15.62±0.10)、(14.45±1.01)和(18.07±0.66)ng/ml,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论雷帕霉素通过下调PPARγ的表达减少脂肪细胞内的脂质蓄积,并且抑制其瘦素分泌,这为临床上雷帕霉素引起的高脂血症提供了一个可能的解释。
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