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目的
探讨circ_SEC23A和miR-30a在心肌细胞损伤过程中的表达和作用。
方法用H2O2和Ang II处理心肌细胞后,荧光定量PCR检测miR-30a和circ_SEC23A的表达;核质分离检测circ_SEC23A的细胞定位;RNA免疫共沉淀(RIP)、pull down和双荧光素酶报告基因实验检测circ_SEC23A和miR-30a的结合关系;转染circ_SEC23A siRNA或miR-30a模拟物至损伤心肌细胞后,荧光定量PCR检测miR-30a和circ_SEC23A的表达,MTT检测细胞活力,流式检测细胞凋亡。
结果H2O2和Ang II能显著抑制miR-30a的表达,却促进circ_SEC23A的表达;circ_SEC23A主要表达于细胞质中,且序列中含有miR-30a的结合位点;RIP发现circ_SEC23A、miR-30a能与Argonaute 2(AGO2)蛋白结合,而RNA pull down证明circ_SEC23A、miR-30a能相互富集对方;双荧光素酶报告基因实验发现,circ_SEC23A能与miR-30a结合而下调荧光素酶的活性;circ_SEC23A表达下调能有效逆转H2O2对miR-30a表达的抑制作用;H2O2抑制心肌细胞存活和促进凋亡,而circ_SEC23A siRNA和miR-30a模拟物均能明显阻断H2O2的上述作用。
结论circ_SEC23A通过miR-30a促进心肌细胞损伤。