【摘 要】
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为建立检测1型鸭疫里氏杆菌(R.anatipestifer)的间接ELISA方法,本研究根据已发表的R.anatipestifer外膜蛋白A(ompA)基因序列(AF104937)设计引物,扩增1型R.anatipestifer HLG1
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆163319;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙
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为建立检测1型鸭疫里氏杆菌(R.anatipestifer)的间接ELISA方法,本研究根据已发表的R.anatipestifer外膜蛋白A(ompA)基因序列(AF104937)设计引物,扩增1型R.anatipestifer HLG1株的ompA基因,构建重组质粒pHtb-ompA,转化大肠杆菌BL21 (DE3),并利用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和western blot结果表明,表达蛋白约为55 ku,具有良好的抗原活性.以纯化的OmpA为包被抗原建立间接ELISA并对条件进行优化.建立的ELISA具有良好的特异性、敏感性;与HLG1株菌体裂解蛋白为抗原的间接ELISA比较,符合率为91.3%.本研究建立的ELISA方法为R.anatipestifer的流行病学调查和SPF鸭的监测提供了快速、特异的血清学诊断方法.
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