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摘要：采用室内玻片浸渍法和叶片浸渍法对18种植物乙醇提取物进行了二斑叶螨雌成螨和卵的触杀活性测定。结果表明，紫茉莉、臭椿、鸡爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜对雌成螨的生物活性较高，在10 mg/mL时，其72 h校正死亡率均为100%。根据初筛结果对这6种植物提取物进行雌成螨和卵的毒力测定，都表现出较强的毒力，其中对雌成螨的LC50依次为4.078、4.686、4.358、5.535、3.679、7.378 mg/mL，对卵的LC50在11.176～60.651 mg/mL之间。
关键词：植物提取物；二斑叶螨；触杀活性；校正死亡率；毒力
中图分类号：S482.3 9 文献标志码：A
文章编号：1002-1302（2014）08-0121-03
二斑叶螨（Tetranychus urticae）是一种危害严重的农林业害虫，在我国各地普遍存在。由于繁殖能力强、世代周期短，二斑叶螨在适宜的条件下种群可迅速扩大，危害植物达150余种，严重影响其产量及品质。对二斑叶螨的控制目前主要依赖于化学农药，但二斑叶螨的生物特性决定了它比其他害虫更易对化学农药产生抗药性[1]。而且化学杀螨剂在杀灭害螨的同时，还会非选择性的杀灭天敌及其他有益生物，破坏生态平衡，并会对生态环境和人类健康产生一定的负面影响。植物体内含有一些黄酮类、生物碱类、苦楝素类、香豆素类等次生代谢物质，这些次生代谢物质与害虫长期协同进化来防御病虫害对其自身的侵害，且这些杀虫物质是自然界中本来存在的物质，对环境污染轻，对人畜健康安全；对害虫作用较为缓慢，主要用于抑制害虫种群增长，符合IPM理论和农业可持续发展战略。植物源杀螨剂的开发研制成为杀螨剂研究的一个热点。笔者采集了15科18种植物，利用其乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨和卵进行室内触杀活性测定，为筛选植物源杀螨活性物质进而研制杀螨剂提供基础数据。
1 材料与方法
1.1 材料
试验所用植物材料均采于沈阳大学及其周边绿地，共15科18种（表1）。将采集的植物材料洗净、阴干，置于中草药粉粹机中粉碎，过80目筛，密封，放入4 ℃医用冷藏柜中備用。
二斑叶螨来自辽宁省城市有害生物治理与生态安全重点实验室。饲养条件：智能人工气候箱，温度（25±1） ℃、相对湿度60%～65%，光照为16 h ∶8 h（L ∶D）。以雌成螨为试验用虫。
1.2 方法
1.2.1 植物提取物的制备
取粉碎的植物材料各20 g置于锥形瓶中，以1 ∶10的比例加入无水乙醇，室温下浸泡提取3次，每次3～5 d，抽滤，合并浸提液，用旋转蒸发仪减压浓缩得各植物材料提取物，计算提取率，并将各植物提取物配制成10 mg/mL的供试药液，备用。
1.2.2 对二斑叶螨雌成螨的室内触杀活性测定
采用联合国粮农组织推荐的玻片浸渍法[2]并稍加改进：将双面胶粘在载玻片的一端，用零号毛笔轻轻挑取体色相同、活泼的雌成螨，将其背部贴在双面胶上，在解剖镜下剔除受伤或粘得不合格的螨，最终使每个载玻片上有30头雌成螨。将粘有雌成螨的载玻片的一端浸入供试药液或空白对照溶液（1%吐温80蒸馏水溶液和少量无水乙醇）中，使螨体完全浸入药液，轻轻振荡5 s，取出后迅速用吸水纸吸去螨体周围多余药液，然后将载玻片放在与上述饲养条件一致的智能人工气候箱中培养。每隔24 h镜检1次，用毛笔轻触螨体，螨足不动者视为死亡，每处理重复3次。计算各试验组的校正死亡率。
1.2.3 对二斑叶螨卵的室内触杀活性测定
参照联合国粮农组织推荐的叶片浸渍法[2]并有所改进：将新鲜、生长旺盛的叶片放在有一定厚度湿棉花的培养皿中，用零号毛笔分别向每张豆叶上挑取健康活泼的雌成螨10头，为防害螨逃逸，用湿棉球和湿棉条将叶柄及叶片周边围好。将培养皿放在温度为（25±1） ℃，相对湿度60%～65%的智能人工气候箱中任其产卵4 h，在解剖镜下剔除雌成螨和多余的卵，最终确保每张叶片上有30粒卵。将带卵叶片浸入事先配制好的供试溶液及空白对照溶液中，轻轻晃动5 s，取出晾干，放置在培养皿中，重新用湿棉条围好，在与上述条件一致的人工气候箱中培养。每天在棉花上加水保湿，每隔24 h在解剖镜下观察卵的孵化情况，记录7 d，7 d内未孵化的卵视为死亡，每处理重复3次。计算各试验组及对照组卵的孵化率。
1.2.4 6种植物提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的毒力测定
将杀螨活性较好的植物提取物在初试的基础上分别配制成12.8、6.4、3.2、1.6、0.8 mg/mL 5个质量浓度不同的溶液，采用玻片浸渍法和叶片浸渍法对二斑叶螨的雌成螨和卵进行毒力测定，确定6种植物提取物的杀螨毒力。
1.2.5 数据统计分析
试验数据根据Abbott公式[3]计算校正死亡率，用Tukey test 进行方差分析，按Probit分析法[4]进行线性回归，计算毒力回归方程、致死中浓度（LC50）及95%置信区间等。
2 结果与分析
2.1 18种植物乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀活性
利用相似相容原理，采用冷浸法对18种植物材料在无水乙醇中进行浸提。由表2可知，各植物材料提取率各不相同，其中牛膝菊的提取率最低，仅为5.1%，芦荟的提取率最高，为29.75%，这主要与植物材料本身的性质有关。通过对二斑叶螨雌成螨的触杀结果可知，随着时间的延长，18种植物提取物对害螨的触杀活性逐渐增强，处理24 h后芦荟、臭椿、鸡爪槭对害螨的校正死亡率超过了80%，处理72 h后紫茉莉、臭椿、鸡爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜对雌成螨都表现出较强的触杀活性，校正死亡率均达到了100%。对卵孵化率测定结果显示，除紫苏、红蓼外，其他植物材料均对害螨的卵有一定的触杀活性，只是对卵的触杀活性没有对雌成螨的触杀活性强。 3 结论与讨论
用乙醇浸提的18种植物提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀结果表明，鸡爪槭、臭椿、藜、紫茉莉、紫花地丁和牛膝菊这6种植物提取物对二斑叶螨的雌成螨和卵均具有较强的触杀活性，其中臭椿提取物对二斑叶螨卵的触杀活性最强，卵的孵化率仅为51.11%。鸡爪槭、牛膝菊等6种植物提取物对二斑叶螨的毒力测定结果表明：6种植物提取物对二斑叶螨雌成螨均有较强的触杀活性。臭椿提取物对二斑叶螨卵的毒力最高，其LC50为11.176 mg/mL。
植物源杀螨剂是环境友好型农药的发展方向，也是目前农药研制的热点，韩俊艳等利用石油醚、丙酮、甲醇等有机溶剂对中草药北细辛进行浸提，并测定其对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀活性，发现北细辛甲醇提取物对害螨雌成螨和卵具有较好的触杀作用[5]。杀螨植物中的杀螨活性物质一般可以直接利用，也可以将这些杀螨活性物质作为杀螨先导化合物，对其进行修饰合成，为进一步研制此类农药新品种奠定基础。在我國，邹怀波等曾把中草药姜黄中的活性成分姜黄素进行修饰改造成姜黄素缩二，发现其对二斑叶螨触杀效果较好[6]。但是，目前对杀螨植物中活性成分分离鉴定的研究仍较少，大都集中在对杀螨植物的筛选与生物活性测定上。近年来，对臭椿皮提取物的研究较多，表明其氯仿提取物对人宫颈癌细胞、骨肉瘤细胞SAOS等有细胞毒作用[7]；其水提取物腹腔注射对小鼠肉瘤S180和肝癌H22移植性肿瘤有较强的抑制作用[8]；其醇提取物在抗病毒[9-11]、抗炎[12]、抑菌[13]等方面有较好的抑制作用；此外，臭椿提取物在触杀光肩星天牛[14]、驱避米象、赤拟谷盗[15]等储粮害虫方面也有较好的防治效果。目前还未有关于臭椿杀螨活性物质的相关报道。因此，有必要进一步开发植物资源，并进行生物活性测定及杀螨活性物质化学成分的分离、活性跟踪及鉴定，为植物源杀螨剂的研制提供技术数据。
参考文献：
[1]何 林，杨 羽，符建章，等. 朱砂叶螨阿维菌素抗性品系选育及适合度研究[J]. 植物保护学报，2004，31（4）：395-400.
[2]Ismail M S，Soliman M F，El Naggar M H，et al. Acaricidal activity of spinosad and abamectin against two-spotted spider mites[J]. Experimental
关键词：植物提取物；二斑叶螨；触杀活性；校正死亡率；毒力
中图分类号：S482.3 9 文献标志码：A
文章编号：1002-1302（2014）08-0121-03
二斑叶螨（Tetranychus urticae）是一种危害严重的农林业害虫，在我国各地普遍存在。由于繁殖能力强、世代周期短，二斑叶螨在适宜的条件下种群可迅速扩大，危害植物达150余种，严重影响其产量及品质。对二斑叶螨的控制目前主要依赖于化学农药，但二斑叶螨的生物特性决定了它比其他害虫更易对化学农药产生抗药性[1]。而且化学杀螨剂在杀灭害螨的同时，还会非选择性的杀灭天敌及其他有益生物，破坏生态平衡，并会对生态环境和人类健康产生一定的负面影响。植物体内含有一些黄酮类、生物碱类、苦楝素类、香豆素类等次生代谢物质，这些次生代谢物质与害虫长期协同进化来防御病虫害对其自身的侵害，且这些杀虫物质是自然界中本来存在的物质，对环境污染轻，对人畜健康安全；对害虫作用较为缓慢，主要用于抑制害虫种群增长，符合IPM理论和农业可持续发展战略。植物源杀螨剂的开发研制成为杀螨剂研究的一个热点。笔者采集了15科18种植物，利用其乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨和卵进行室内触杀活性测定，为筛选植物源杀螨活性物质进而研制杀螨剂提供基础数据。
1 材料与方法
1.1 材料
试验所用植物材料均采于沈阳大学及其周边绿地，共15科18种（表1）。将采集的植物材料洗净、阴干，置于中草药粉粹机中粉碎，过80目筛，密封，放入4 ℃医用冷藏柜中備用。
二斑叶螨来自辽宁省城市有害生物治理与生态安全重点实验室。饲养条件：智能人工气候箱，温度（25±1） ℃、相对湿度60%～65%，光照为16 h ∶8 h（L ∶D）。以雌成螨为试验用虫。
1.2 方法
1.2.1 植物提取物的制备
取粉碎的植物材料各20 g置于锥形瓶中，以1 ∶10的比例加入无水乙醇，室温下浸泡提取3次，每次3～5 d，抽滤，合并浸提液，用旋转蒸发仪减压浓缩得各植物材料提取物，计算提取率，并将各植物提取物配制成10 mg/mL的供试药液，备用。
1.2.2 对二斑叶螨雌成螨的室内触杀活性测定
采用联合国粮农组织推荐的玻片浸渍法[2]并稍加改进：将双面胶粘在载玻片的一端，用零号毛笔轻轻挑取体色相同、活泼的雌成螨，将其背部贴在双面胶上，在解剖镜下剔除受伤或粘得不合格的螨，最终使每个载玻片上有30头雌成螨。将粘有雌成螨的载玻片的一端浸入供试药液或空白对照溶液（1%吐温80蒸馏水溶液和少量无水乙醇）中，使螨体完全浸入药液，轻轻振荡5 s，取出后迅速用吸水纸吸去螨体周围多余药液，然后将载玻片放在与上述饲养条件一致的智能人工气候箱中培养。每隔24 h镜检1次，用毛笔轻触螨体，螨足不动者视为死亡，每处理重复3次。计算各试验组的校正死亡率。
1.2.3 对二斑叶螨卵的室内触杀活性测定
参照联合国粮农组织推荐的叶片浸渍法[2]并有所改进：将新鲜、生长旺盛的叶片放在有一定厚度湿棉花的培养皿中，用零号毛笔分别向每张豆叶上挑取健康活泼的雌成螨10头，为防害螨逃逸，用湿棉球和湿棉条将叶柄及叶片周边围好。将培养皿放在温度为（25±1） ℃，相对湿度60%～65%的智能人工气候箱中任其产卵4 h，在解剖镜下剔除雌成螨和多余的卵，最终确保每张叶片上有30粒卵。将带卵叶片浸入事先配制好的供试溶液及空白对照溶液中，轻轻晃动5 s，取出晾干，放置在培养皿中，重新用湿棉条围好，在与上述条件一致的人工气候箱中培养。每天在棉花上加水保湿，每隔24 h在解剖镜下观察卵的孵化情况，记录7 d，7 d内未孵化的卵视为死亡，每处理重复3次。计算各试验组及对照组卵的孵化率。
1.2.4 6种植物提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的毒力测定
将杀螨活性较好的植物提取物在初试的基础上分别配制成12.8、6.4、3.2、1.6、0.8 mg/mL 5个质量浓度不同的溶液，采用玻片浸渍法和叶片浸渍法对二斑叶螨的雌成螨和卵进行毒力测定，确定6种植物提取物的杀螨毒力。
1.2.5 数据统计分析
试验数据根据Abbott公式[3]计算校正死亡率，用Tukey test 进行方差分析，按Probit分析法[4]进行线性回归，计算毒力回归方程、致死中浓度（LC50）及95%置信区间等。
2 结果与分析
2.1 18种植物乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀活性
利用相似相容原理，采用冷浸法对18种植物材料在无水乙醇中进行浸提。由表2可知，各植物材料提取率各不相同，其中牛膝菊的提取率最低，仅为5.1%，芦荟的提取率最高，为29.75%，这主要与植物材料本身的性质有关。通过对二斑叶螨雌成螨的触杀结果可知，随着时间的延长，18种植物提取物对害螨的触杀活性逐渐增强，处理24 h后芦荟、臭椿、鸡爪槭对害螨的校正死亡率超过了80%，处理72 h后紫茉莉、臭椿、鸡爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜对雌成螨都表现出较强的触杀活性，校正死亡率均达到了100%。对卵孵化率测定结果显示，除紫苏、红蓼外，其他植物材料均对害螨的卵有一定的触杀活性，只是对卵的触杀活性没有对雌成螨的触杀活性强。 3 结论与讨论
用乙醇浸提的18种植物提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀结果表明，鸡爪槭、臭椿、藜、紫茉莉、紫花地丁和牛膝菊这6种植物提取物对二斑叶螨的雌成螨和卵均具有较强的触杀活性，其中臭椿提取物对二斑叶螨卵的触杀活性最强，卵的孵化率仅为51.11%。鸡爪槭、牛膝菊等6种植物提取物对二斑叶螨的毒力测定结果表明：6种植物提取物对二斑叶螨雌成螨均有较强的触杀活性。臭椿提取物对二斑叶螨卵的毒力最高，其LC50为11.176 mg/mL。
植物源杀螨剂是环境友好型农药的发展方向，也是目前农药研制的热点，韩俊艳等利用石油醚、丙酮、甲醇等有机溶剂对中草药北细辛进行浸提，并测定其对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀活性，发现北细辛甲醇提取物对害螨雌成螨和卵具有较好的触杀作用[5]。杀螨植物中的杀螨活性物质一般可以直接利用，也可以将这些杀螨活性物质作为杀螨先导化合物，对其进行修饰合成，为进一步研制此类农药新品种奠定基础。在我國，邹怀波等曾把中草药姜黄中的活性成分姜黄素进行修饰改造成姜黄素缩二，发现其对二斑叶螨触杀效果较好[6]。但是，目前对杀螨植物中活性成分分离鉴定的研究仍较少，大都集中在对杀螨植物的筛选与生物活性测定上。近年来，对臭椿皮提取物的研究较多，表明其氯仿提取物对人宫颈癌细胞、骨肉瘤细胞SAOS等有细胞毒作用[7]；其水提取物腹腔注射对小鼠肉瘤S180和肝癌H22移植性肿瘤有较强的抑制作用[8]；其醇提取物在抗病毒[9-11]、抗炎[12]、抑菌[13]等方面有较好的抑制作用；此外，臭椿提取物在触杀光肩星天牛[14]、驱避米象、赤拟谷盗[15]等储粮害虫方面也有较好的防治效果。目前还未有关于臭椿杀螨活性物质的相关报道。因此，有必要进一步开发植物资源，并进行生物活性测定及杀螨活性物质化学成分的分离、活性跟踪及鉴定，为植物源杀螨剂的研制提供技术数据。
参考文献：
[1]何 林，杨 羽，符建章，等. 朱砂叶螨阿维菌素抗性品系选育及适合度研究[J]. 植物保护学报，2004，31（4）：395-400.
[2]Ismail M S，Soliman M F，El Naggar M H，et al. Acaricidal activity of spinosad and abamectin against two-spotted spider mites[J]. Experimental