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本文旨在建立血液和尿液中西地那非及3种主要代谢产物（N-去甲基西地那非、去乙烷西地那非和哌嗪-N-去烷基西地那非）的超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS/MS）分析方法，并通过动物实验收集其血液和尿液作为待测样本对该方法加以验证。取血液或尿液200μL，以西地那非-d8为内标，加800μL乙腈沉淀蛋白。选用Waters BEH C18（2.1 mm×100 mm×1.7μm）色谱柱，流动相以0.01%甲酸水（2 mmol/L甲酸铵）为A相，乙腈为B相，梯度洗脱分离。质谱仪采用电喷雾离子源，正离子模式进行分析。该方法在血液和尿液中西地那非及3种主要代谢产物的检出限均可达到2ng/mL；血添加样品中西地那非及其3种主要代谢物在5～1000ng/mL之间线性关系均良好（r≥0.997）；尿添加样品中西地那非、N-去甲基西地那非和去乙烷西地那非在5～5000 ng/mL之间线性关系良好（r≥0.997），哌嗪-N-去烷基西地那非在5～1000 ng/mL之间线性关系良好（r=0.999）；血液和尿液中西地那非、N-去甲基西地那非、去乙烷西地那非和哌嗪-N-去烷基西地那非的提取回收率分别在102.27%～109.70%、 77.16%～106.40%、 84.22%～107.67、 92.02%～102.59%范围内；日内精密度分别在6.35%～11.07%、1.73%～9.81%、1.53%～11.19%、5.52%～12.51%范围内，日间精密度分别在8.19%～14.24%、1.79%～10.37%、 1.71%～12.32%、 6.41%～12.40%范围内；准确度分别在91.05%～103.27%、 88.00%～110.20%、87.48%～111.31%、95.66%～112.73%范围内。用建立的分析方法对动物实验收集的血液和尿液样本进行定性定量分析，结果表明西地那非及其3种主要代谢物在血液和尿液样本中均可检出。该方法前处理操作简便，灵敏度高，线性范围宽，适用于血液和尿液中西地那非及其3种主要代谢产物的检验。