【摘 要】
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利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18-T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳,110161;东
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利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18-T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pET-MPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,重组质粒pET-MPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符.经M柱纯化后,Western blot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Western blot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性,结果表明特异性较好.
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