论文部分内容阅读
摘要：以5个品种长寿花的叶片和茎段为试验材料，开展长寿花试管苗繁育研究，探讨光照强度及不同植物激素组合对愈伤诱导率、丛芽诱导率、增殖系数等方面的影响。结果发现，不同品种之间存在差异，月桂、节日、霍恩愈伤诱导最佳培养基为MS 1.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA；西伦的为MS 2.0 mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA；紫缤的为MS 1.5 mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA。月桂、西伦丛芽诱导最佳培养基为MS 2.0mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA，节日的为MS 1.0 mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA，紫缤、霍恩的为MS 1.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA。月桂增殖最佳培养基为MS 0.2 mg/L 6-BA 0.2 mg/L ZT 0.3 mg/L NAA，节日为MS 0.4 mg/L ZT 0.3 mg/L NAA，西伦、霍恩的为MS 0.4 mg/L 6-BA 0.4 mg/L ZT 0.2 mg/L NAA，紫缤的为MS 0.4 mg/L 6-BA 0.3 mg/L NAA。花泥作为载体进行瓶外生根，生根率达90%以上，最佳光照度为2 500 lx。
关键词：长寿花；试管苗；品种差异；再生体系
中图分类号： S682.390.4 3文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）09-0027-03
长寿花（Kalanchoe blossfeldiana）是景天科伽蓝菜属肉质草本花卉，原产马达加斯加，别称矮生伽蓝菜、寿星花、假川莲，因其花叶可观，花期长、耐干旱、栽培容易、装饰效果好，是国际花卉市场中发展最快的盆花之一[1-2]。随着品种不断推陈出新，市场品种越来越多。目前，国内有关长寿花组织培养差异性研究较少和缺乏系统的研究，且不同研究者的结果差异较大[3]。本试验以5个品种长寿花为材料，比较其试管苗愈伤诱导、丛芽诱导、丛芽增殖、生根差异，研究品种差异性及影响长寿花试管育苗玻璃化、徒长的主要因子，为提高试管育苗成活率提供科学依据，并为研究不同品种长寿花试管苗再生体系的建立奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
试验材料取自宁夏园艺产业园花艺馆，为长寿花月桂（Loren）、节日（Fiesta）、西伦（Theron）、紫缤（Leonardo）、霍恩（Hawn）品种的叶片和茎段。
1.2试验方法
1.2.1不同品种长寿花启动培养基筛选
启动培养基成分：MS 不同浓度6-BA和NAA（表1），附加30 g/L蔗糖、6 g/L 琼脂，pH值为5.8。试验材料用洗洁精清洗3 min，流水冲洗 15 min 后，置于超净工作台上，将叶片用0.1% Hgcl2灭菌 8 min，茎段灭菌10 min，再用无菌水冲洗3遍。外植体经过灭菌处理后，将叶片切成1.5 cm×1.5 cm大小，茎段切成1.5～2.0 cm小段，接种于初代培养基中，培养温度为（24±2） ℃。每瓶接种3个外植体，每个處理10瓶，试验重复3次，30 d后统计愈伤诱导率和丛芽诱导率。
1.2.2不同品种长寿花继代培养基筛选
试验采取L9（34）正交设计，选择6-BA、ZT、NAA等3种激素，共9个处理（表2）。切取初代培养的无菌苗接种到不同激素配比的增殖培养基，每处理接种10瓶，重复3次，培养30 d后统计增殖后的总芽数，计算增殖系数、玻璃化率。
1.2.3光照度对长寿花生长的影响
将5个品种初代培养的无菌苗转接于对应的继代增殖最佳培养基上，设光照度分别为1 500、2 000、2 500 lx，培养60 d后统计节数、节间长度。
1.2.4长寿花瓶外生根
选取继代培养中生长健壮、高（45±0.3） cm、具2对叶的无菌苗，作为瓶外生根的植株，炼苗后插入填有花泥（用牙签戳洞）和草炭，并添加不同浓度NAA处理的穴盘内，每穴1株，插入深度为1.5～2 cm，30 d后，统计生根率。
1.3数据统计及分析
采用DPS软件对数据进行处理，采用Duncans新复极差法进行多重比较。
愈伤诱导率=出现愈伤的外植体数/未污染的外植体数×100%；
丛芽诱导率=萌生丛芽的外植体数/未污染的外植体数×100%；
增值系数=增殖后的总芽数/接种的芽数；
玻璃化率=玻璃化的总苗数/接种的总苗数×100%；
生根率=生根株数/培养株数×100%。
2结果与分析
2.1不同品种长寿花初代培养
2.1.1不同品种长寿花叶片愈伤诱导差异性比较
研究发现，不同处理间长寿花叶片愈伤诱导率存在差异，其中A1为月桂、节日、霍恩3个品种最佳愈伤诱导培养基，该处理中的愈伤诱导率显著高于其他5个处理。西伦的愈伤诱导率在A1和A6间无显著差异，但两者与A2、A3、A4、A5差异极显著；由于A6愈伤生长状况优于A1，因此A6为西伦愈伤诱导最佳培养基。紫缤的愈伤诱导率在A2和A4间无显著差异，两者与A1、A3、A5、A6之间差异极显著；由于A4愈伤生长状况优于A2，因此A4为紫缤愈伤诱导最佳培养基（表3、表4）。
2.2.2不同品种长寿花茎段丛芽诱导差异性比较
研究发现，A6为月桂最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中月桂茎段丛芽诱导率极显著高于A1、A2、A3、A4、A5处理。A2为节日最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中节日茎段丛芽诱导率与A1、A3、A4、A5、A6之间差异极显著。A6为西伦最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中茎段丛芽诱导率与A1、A2、A3、A4、A5之间差异极显著。紫缤芽诱导率在A1和A2之间无显著差异，但两者与A3、A4、A5、A6差异极显著；由于在A1培养基中丛芽生长状况优于A2培养基，因此A1为最佳丛芽诱导培养基。A1为霍恩最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中其茎段丛芽诱导率与A1、A2、A3、A4、A5之间差异极显著（表5、表6）。 2.2不同品种长寿花继代增殖培养
2.2.1不同激素水平对继代增殖的影响
月桂、西伦、霍恩在E9中与其余8个处理差异显著，E9增殖效果好。E3、E6、E7、E8、E9之间节日增殖系数差异不显著，但与E1、E2、E4差异显著，E3、E6、E7、E8、E9增殖效果好。紫缤在E6、E7、E8、E9之间差异不显著，但其与E1、E2、E3、E4、E5差异显著，E6、E7、E8、E9增殖效果好（表7）。
2.2.2不同激素水平对长寿花继代增殖玻璃化的影响
研究发现，各因素对长寿花玻璃化影响程度是6-BA>ZT>NAA。月桂在E1、E2、E3、E4、E5之間无差异，均无玻璃化，但其与E6、E7、E8、E9差异显著；综合考虑增殖系数、玻璃化率，E5在无玻璃化情况的处理中为最佳继代增殖培养基。节日在E1、E2、E3、E4之间无差异，其与其他5组处理差异显著；结合增殖系数分析结果，E3在无玻璃化情况的处理中为最佳继代增殖培养基。紫缤在E1、E2、E3、E4、E5、E7之间无差异，其与E6、E8、E9差异显著；结合增值系数分析结果，E7在无玻璃化情况的处理中为最佳继代增殖培养基。西伦、霍恩无玻璃化，E9仍为最佳继代增殖培养基（表8）。
2.2.3光照度对试管苗生长的影响
继代中，不同品种出现了不同程度的徒长现象，通过改变光照度控制试管苗徒长，获得良好株型。研究发现，5个品种在不同光照度处理下生长差异显著。随着光照度的递增，节数变化没有表现一致的规律。C3节间长和C1、C2有显著差异，5个品种表现一致，光照越强，节间越短，最适宜光照度均为C3（2 500 lx）（表9）。
2.3长寿花瓶外生根
研究发现，4、5、6组处理的生根率与1、2、3组处理有极显著差异。长寿花组培苗瓶外生根，花泥作为载体适宜，生根率达到90%以上，与瓶内生根差别不大（表10）。由于瓶外生根可省去组培苗生根这一环节，避免了炼苗困难问题，因此可缩短生产周期、节约成本。
3结论与讨论
本试验对5个品种的长寿花组培再生系统进行了研究，建立了其稳定高效的组织快繁体系，筛选出了5个品种的最佳诱导培养基、增殖培养基，并分析了组织培养中影响玻璃化的因素，发现长寿花玻璃化因素为6-BA>ZT>NAA，其中 6-BA为主要因子。月桂玻璃化率高达73.28%，节日为6879%，紫缤为7.51%。通过对光照控制，减缓了长寿花组培苗徒长，发现长寿花继代增殖培养的最适宜光照度为 2 500 lx。此外，比较了长寿花瓶外生根的方法，并筛选出花泥为较适宜瓶外生根载体，生根率达90%。
试验结果表明，不同品种愈伤组织诱导最佳外植体均为叶片，但最佳诱导培养基不同。以茎段为外植体直接进行丛芽诱导，其最佳诱导培养基也不同，这可能与品种间的遗传差异性有关。在一定浓度范围内，6-BA浓度越大，增殖系数越大，但6-BA、ZT在继代增殖过程对玻璃化率影响显著，说明长寿花对6-BA、ZT比较敏感。这与林玉玲等研究结果[4]一致，当6-BA超过一定浓度时，植株分裂快，导致营养和水分都不足，植物茎秆细，叶片小，茎叶比例不协调。试验结果还表明长寿花试管苗节间长、徒长与光照度有关，对高效工厂化育苗有一定的指导作用，但徒长与光质、光照时间、温度、水分的关系还需要在以后的试验中进一步探索。
长寿花组培过程中极易生根[5-7]，在增殖培养过程中有根生成，在不添加任何激素的MS培养基中能较好生根；直接用花泥进行瓶外生根，生根率达到90%以上。生产上，可以采用此法，降低生产成本，缩短育苗时间。
参考文献：
[1]史建林，曹骏. 长寿花栽培养护技术[J]. 上海农业科技，2012（2）：94-94.
[2]贺爱利，黄海帆. 长寿花组织培养研究进展[J]. 河南农业，2012（14）：44-45.
[3]颜俊. 长寿花品种选择与盆花生产[J]. [HJ1.5mm]中国花卉园艺，2005（16）：12-15.
[4]林玉玲，赖钟雄，林菁，等. 4个品种长寿花试管苗的增殖与生根培养[J]. 热带作物学报，2007，28（2）：80-86.
[5]孙利娜. 长寿花嫩叶片的组织培养研究[J]. 西部林业科学，2011，40（2）：48-51.
[6]孙新政，李庆伟，梁明勤. 白花长寿花组培快繁技术研究[J]. 中国农学通报，2006，22（3）：39-42.
[7]刘红美，夏开德，方小波，等. 长寿花高繁殖组培体系及瓶外生根技术[J]. 安徽农业科学，2010，38（12）：6112-6115.
关键词：长寿花；试管苗；品种差异；再生体系
中图分类号： S682.390.4 3文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）09-0027-03
长寿花（Kalanchoe blossfeldiana）是景天科伽蓝菜属肉质草本花卉，原产马达加斯加，别称矮生伽蓝菜、寿星花、假川莲，因其花叶可观，花期长、耐干旱、栽培容易、装饰效果好，是国际花卉市场中发展最快的盆花之一[1-2]。随着品种不断推陈出新，市场品种越来越多。目前，国内有关长寿花组织培养差异性研究较少和缺乏系统的研究，且不同研究者的结果差异较大[3]。本试验以5个品种长寿花为材料，比较其试管苗愈伤诱导、丛芽诱导、丛芽增殖、生根差异，研究品种差异性及影响长寿花试管育苗玻璃化、徒长的主要因子，为提高试管育苗成活率提供科学依据，并为研究不同品种长寿花试管苗再生体系的建立奠定基础。
1材料与方法
1.1材料
试验材料取自宁夏园艺产业园花艺馆，为长寿花月桂（Loren）、节日（Fiesta）、西伦（Theron）、紫缤（Leonardo）、霍恩（Hawn）品种的叶片和茎段。
1.2试验方法
1.2.1不同品种长寿花启动培养基筛选
启动培养基成分：MS 不同浓度6-BA和NAA（表1），附加30 g/L蔗糖、6 g/L 琼脂，pH值为5.8。试验材料用洗洁精清洗3 min，流水冲洗 15 min 后，置于超净工作台上，将叶片用0.1% Hgcl2灭菌 8 min，茎段灭菌10 min，再用无菌水冲洗3遍。外植体经过灭菌处理后，将叶片切成1.5 cm×1.5 cm大小，茎段切成1.5～2.0 cm小段，接种于初代培养基中，培养温度为（24±2） ℃。每瓶接种3个外植体，每个處理10瓶，试验重复3次，30 d后统计愈伤诱导率和丛芽诱导率。
1.2.2不同品种长寿花继代培养基筛选
试验采取L9（34）正交设计，选择6-BA、ZT、NAA等3种激素，共9个处理（表2）。切取初代培养的无菌苗接种到不同激素配比的增殖培养基，每处理接种10瓶，重复3次，培养30 d后统计增殖后的总芽数，计算增殖系数、玻璃化率。
1.2.3光照度对长寿花生长的影响
将5个品种初代培养的无菌苗转接于对应的继代增殖最佳培养基上，设光照度分别为1 500、2 000、2 500 lx，培养60 d后统计节数、节间长度。
1.2.4长寿花瓶外生根
选取继代培养中生长健壮、高（45±0.3） cm、具2对叶的无菌苗，作为瓶外生根的植株，炼苗后插入填有花泥（用牙签戳洞）和草炭，并添加不同浓度NAA处理的穴盘内，每穴1株，插入深度为1.5～2 cm，30 d后，统计生根率。
1.3数据统计及分析
采用DPS软件对数据进行处理，采用Duncans新复极差法进行多重比较。
愈伤诱导率=出现愈伤的外植体数/未污染的外植体数×100%；
丛芽诱导率=萌生丛芽的外植体数/未污染的外植体数×100%；
增值系数=增殖后的总芽数/接种的芽数；
玻璃化率=玻璃化的总苗数/接种的总苗数×100%；
生根率=生根株数/培养株数×100%。
2结果与分析
2.1不同品种长寿花初代培养
2.1.1不同品种长寿花叶片愈伤诱导差异性比较
研究发现，不同处理间长寿花叶片愈伤诱导率存在差异，其中A1为月桂、节日、霍恩3个品种最佳愈伤诱导培养基，该处理中的愈伤诱导率显著高于其他5个处理。西伦的愈伤诱导率在A1和A6间无显著差异，但两者与A2、A3、A4、A5差异极显著；由于A6愈伤生长状况优于A1，因此A6为西伦愈伤诱导最佳培养基。紫缤的愈伤诱导率在A2和A4间无显著差异，两者与A1、A3、A5、A6之间差异极显著；由于A4愈伤生长状况优于A2，因此A4为紫缤愈伤诱导最佳培养基（表3、表4）。
2.2.2不同品种长寿花茎段丛芽诱导差异性比较
研究发现，A6为月桂最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中月桂茎段丛芽诱导率极显著高于A1、A2、A3、A4、A5处理。A2为节日最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中节日茎段丛芽诱导率与A1、A3、A4、A5、A6之间差异极显著。A6为西伦最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中茎段丛芽诱导率与A1、A2、A3、A4、A5之间差异极显著。紫缤芽诱导率在A1和A2之间无显著差异，但两者与A3、A4、A5、A6差异极显著；由于在A1培养基中丛芽生长状况优于A2培养基，因此A1为最佳丛芽诱导培养基。A1为霍恩最佳丛芽诱导培养基，在该培养基中其茎段丛芽诱导率与A1、A2、A3、A4、A5之间差异极显著（表5、表6）。 2.2不同品种长寿花继代增殖培养
2.2.1不同激素水平对继代增殖的影响
月桂、西伦、霍恩在E9中与其余8个处理差异显著，E9增殖效果好。E3、E6、E7、E8、E9之间节日增殖系数差异不显著，但与E1、E2、E4差异显著，E3、E6、E7、E8、E9增殖效果好。紫缤在E6、E7、E8、E9之间差异不显著，但其与E1、E2、E3、E4、E5差异显著，E6、E7、E8、E9增殖效果好（表7）。
2.2.2不同激素水平对长寿花继代增殖玻璃化的影响
研究发现，各因素对长寿花玻璃化影响程度是6-BA>ZT>NAA。月桂在E1、E2、E3、E4、E5之間无差异，均无玻璃化，但其与E6、E7、E8、E9差异显著；综合考虑增殖系数、玻璃化率，E5在无玻璃化情况的处理中为最佳继代增殖培养基。节日在E1、E2、E3、E4之间无差异，其与其他5组处理差异显著；结合增殖系数分析结果，E3在无玻璃化情况的处理中为最佳继代增殖培养基。紫缤在E1、E2、E3、E4、E5、E7之间无差异，其与E6、E8、E9差异显著；结合增值系数分析结果，E7在无玻璃化情况的处理中为最佳继代增殖培养基。西伦、霍恩无玻璃化，E9仍为最佳继代增殖培养基（表8）。
2.2.3光照度对试管苗生长的影响
继代中，不同品种出现了不同程度的徒长现象，通过改变光照度控制试管苗徒长，获得良好株型。研究发现，5个品种在不同光照度处理下生长差异显著。随着光照度的递增，节数变化没有表现一致的规律。C3节间长和C1、C2有显著差异，5个品种表现一致，光照越强，节间越短，最适宜光照度均为C3（2 500 lx）（表9）。
2.3长寿花瓶外生根
研究发现，4、5、6组处理的生根率与1、2、3组处理有极显著差异。长寿花组培苗瓶外生根，花泥作为载体适宜，生根率达到90%以上，与瓶内生根差别不大（表10）。由于瓶外生根可省去组培苗生根这一环节，避免了炼苗困难问题，因此可缩短生产周期、节约成本。
3结论与讨论
本试验对5个品种的长寿花组培再生系统进行了研究，建立了其稳定高效的组织快繁体系，筛选出了5个品种的最佳诱导培养基、增殖培养基，并分析了组织培养中影响玻璃化的因素，发现长寿花玻璃化因素为6-BA>ZT>NAA，其中 6-BA为主要因子。月桂玻璃化率高达73.28%，节日为6879%，紫缤为7.51%。通过对光照控制，减缓了长寿花组培苗徒长，发现长寿花继代增殖培养的最适宜光照度为 2 500 lx。此外，比较了长寿花瓶外生根的方法，并筛选出花泥为较适宜瓶外生根载体，生根率达90%。
试验结果表明，不同品种愈伤组织诱导最佳外植体均为叶片，但最佳诱导培养基不同。以茎段为外植体直接进行丛芽诱导，其最佳诱导培养基也不同，这可能与品种间的遗传差异性有关。在一定浓度范围内，6-BA浓度越大，增殖系数越大，但6-BA、ZT在继代增殖过程对玻璃化率影响显著，说明长寿花对6-BA、ZT比较敏感。这与林玉玲等研究结果[4]一致，当6-BA超过一定浓度时，植株分裂快，导致营养和水分都不足，植物茎秆细，叶片小，茎叶比例不协调。试验结果还表明长寿花试管苗节间长、徒长与光照度有关，对高效工厂化育苗有一定的指导作用，但徒长与光质、光照时间、温度、水分的关系还需要在以后的试验中进一步探索。
长寿花组培过程中极易生根[5-7]，在增殖培养过程中有根生成，在不添加任何激素的MS培养基中能较好生根；直接用花泥进行瓶外生根，生根率达到90%以上。生产上，可以采用此法，降低生产成本，缩短育苗时间。
参考文献：
[1]史建林，曹骏. 长寿花栽培养护技术[J]. 上海农业科技，2012（2）：94-94.
[2]贺爱利，黄海帆. 长寿花组织培养研究进展[J]. 河南农业，2012（14）：44-45.
[3]颜俊. 长寿花品种选择与盆花生产[J]. [HJ1.5mm]中国花卉园艺，2005（16）：12-15.
[4]林玉玲，赖钟雄，林菁，等. 4个品种长寿花试管苗的增殖与生根培养[J]. 热带作物学报，2007，28（2）：80-86.
[5]孙利娜. 长寿花嫩叶片的组织培养研究[J]. 西部林业科学，2011，40（2）：48-51.
[6]孙新政，李庆伟，梁明勤. 白花长寿花组培快繁技术研究[J]. 中国农学通报，2006，22（3）：39-42.
[7]刘红美，夏开德，方小波，等. 长寿花高繁殖组培体系及瓶外生根技术[J]. 安徽农业科学，2010，38（12）：6112-6115.