【摘 要】
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为了建立一种快速定量检测血清中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgG抗体时间分辨荧光免疫层析(TRFIA)的检测方法,本研究采用竞争法和荧光免疫层析
【机 构】
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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070
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为了建立一种快速定量检测血清中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgG抗体时间分辨荧光免疫层析(TRFIA)的检测方法,本研究采用竞争法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球与PEDV S蛋白偶联,以抗IgG FC片段单抗和PEDV S1单抗作为试纸条检测线(T线)和质控线(C线),制备PEDV IgG抗体检测荧光定量免疫层析试纸条.通过对蛋白与荧光微球偶联方法、包被抗体量等对本研究工艺进行优化,并通过线性范围、最低检出限、精密性等性能指标以及与临床样品检测结果比对,对PEDV IgG抗体时间分辨荧光层析检测方法进行评价.结果显示,本研究所制备的PEDV IgG抗体检测试纸条线性范围为25?2 500 g/L,低检出限为25 g/L,批内变异系数与批间变异系数均小于15％,平均添加回收率为100.88％?102.70％,检测时间为15 min,试纸条与5种其他猪病血清抗体无交叉反应.临床样品检测发现,其与实验室间接免疫荧光检测结果符合率为95.6％.综上,本研究所研制的PEDV IgG抗体检测时间分辨荧光免疫层析试纸条灵敏度较高、特异性较高、准确度高、操作简便、快速,可用于临床PEDV IgG抗体的检测.
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