【摘 要】
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[目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表
【机 构】
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南京医科大学附属淮安第一医院,中山大学肿瘤防治中心
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[目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclin D1基因的shRNA表达质粒(pshRNA-419和pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制cyclin D1基因表达;抑制K562细胞增殖,影响其集落形成能力;细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡明显。而m-pshRNA-790质粒并无上述生物学效应。[结论]cyclin D1基因表达下调可抑制K562细胞生长,影响细胞周期分布,并诱导细胞凋亡。提示cyclin D1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。
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