魁蚶(Scapharca broughtonii)血红蛋白Ⅰ基因克隆及表达特征

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血红蛋白是红细胞的主要组成成分,在高等动物中分布广泛,具有运载氧气等多种重要功能。然而,软体动物血红蛋白的相关研究较少。魁蚶(Scapharca broughtonii)作为重要的大型经济蚶类,其血淋巴因含有红细胞而不同于其他多数双壳贝类。为明确魁蚶血红蛋白基因的结构特征、组织分布以及发生、免疫活性等特点,本研究以从魁蚶转录组数据库中获得的部分序列为基础,通过cDNA末端快速扩增(rapid amplication of cDNA ends,RACE)技术克隆获得了一种魁蚶血红蛋白基因cDNA全长序列(命名为SbHbⅠ),并进行了不同条件下mRNA表达研究。序列和结构分析表明,SbHbⅠ基因cDNA全长为867 bp,其中包括长度为483 bp的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),编码160个氨基酸,预测蛋白分子量为17.5 kDa,理论等电点为9.68;氨基酸序列具有多个血红素结合位点,序列与其他物种的相似度范围为57%-93%,与蚶科相似度较高。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,在魁蚶成体的斧足、鳃、外套膜、闭壳肌、血淋巴、肝胰腺,以及受精卵至发育23天的幼虫体内均能检测到SbHbⅠ基因;该基因在成体血淋巴中表达量最高,与其他5个组织表达量存在显著差异(p<0.05);受精卵至23d幼虫期的表达,基本呈现为先降后升的趋势,且在12天时急剧上升(p<0.05);鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激和低氧胁迫后,血淋巴中SbHbⅠ基因的表达均呈先上升后下降的趋势,表达量最高值均出现在16 h。本研究丰富了贝类血红蛋白相关研究资料。
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