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[摘要]目的研究乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法）即HBsAg/TP联合检测试剂用于献血者血液初筛的效果。方法选择2014年9月～2015年12月，在东莞市中心血站献血的献血者为研究对象，其中2014年9月～2015年4月献血的为对照组（43952人），初筛血液使用乙肝试纸条检测血液，2015年5～12月献血的为观察组（45 810人），初筛血液使用HBsAg/TP联合检测试剂，比较两者血液报废率。结果使用HBsAg/TP联合检测试剂初筛血液后，血液因乙肝表面抗原阳性而报废从0.68%下降至0.56%，差异有统计学意义（P<0.05）；血液因梅毒螺旋体抗体阳性而报废的从0.68%下降至0.21%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论使用乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法）进行血液初筛，操作简单、可靠，能大大降低血液的报废率，值得在各大血站推广。
[关键词]HBV；TP；HBsAg/TP联合检测试剂；血液初筛；实验室检测
当前我国乙肝病毒感染与梅毒疫情流行形势日益严重，呈持续增长和局部高流行态势，乙肝病毒与梅毒正从高危人群向一般人群扩散，在无偿献血人群中乙肝病毒与梅毒感染者检出率不断增多。乙型肝炎病毒和梅毒螺旋体病毒也是目前我国采供血机构对献血者进行血液检测的必检项目，也是血液报废的重要原因。当前梅毒的实验室检测方法主要有病原学检查和血清学试验，血清学试验又梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（rTA-ABS）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）等；乙肝病毒的检测主要为HBsAg、抗-HBV检测等，而ELISA法在临床应用的时间较早，金标法是近年建立起来的免疫学检测法。为了提高工作效率，避免不必要的血液报废，2015年5月，我站开始使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法，HBsAg/TP）对无偿献血者进行初筛，取得较好的成效，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选择2014年9月～2015年12月，在东莞市中心血站献血的献血者为研究对象，共89762人，其中2014年9月～2015年4月献血人数43 952人为对照组，其中男23 852例，女20000例；年龄19～67岁，平均（45.2±3.1）岁；血液初筛项目：血型、乙型肝炎表面抗原、血红蛋白、谷氨酸氨基转移酶；2015年5月～2015年12月献血人数45 810人为观察组，其中男24 810例，女21 000例；年龄18～68岁，平均（45.1±4.1）岁；血液初筛项目：应用HBsAg/TP联合检测试剂检测乙型肝炎表面抗原和梅毒抗体，其他检测项目与对照组相同。两组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2检测仪器和方法
初筛用厦门英科新创公司HBsAg/TP胶体金联合检测试纸条（批号7J0615，8F0619），复检用北京万泰生物科技有限公司梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（批号N20071207，N20090101）、珠海丽珠生物科技有限公司梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（批号20071107，20081223）、乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（批号20140921，20151009）和罗氏诊断产品有限公司核酸检测试剂盒（批号L046010，L274420）。所用试剂均为中国药品生物制品检定所批批检合格，在有效期内使用。检测仪器包括Thermo Electron移液器，TECANEVO 200/8全自动加样系统，德国Dade BehringBEPIII全自动酶免疫分析系统，Hamilton STAR全自动混样器COBAS AmpliPrep全自动提取仪COBAS Taqman Analyzer全自动扩增仪，仪器均在校准期内。
初筛为手工加样，复检采用ELISA双抗原夹心法、ELISA双抗体夹心法和核酸检测法，由有资质的检验人员进行检验。对89762份标本不合格率进行分析，检验结果判定：两种试剂均为无反应性定义为合格，无论其中一种试剂为反应性定义为不合格。
1.3统计学处理
选择SPSS14.00软件进行数据分析，计数资料以%表示，采用x2检验，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组乙肝检测情况比较
使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法）进行血液初筛后，因乙肝阳性而报废率的血液从0.68%下降至0.56%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2两组梅毒检测情况比较
经过检测，梅毒螺旋体抗体阳性报废率的血液从原来的0.68%下降至0.21%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3讨论
众所周知，我国是乙肝大国，2014年乙型肝炎病例报告90多万例，据估算全国约有3000万乙型肝炎患者，全国各地血站按《献血者健康检查要求》，把乙型肝炎表面抗原检测作为血液初筛的必检项目，有效减低血液报废率，梅毒近年来也呈流行趋势，已不再局限于高危人群，不同人群均有抗-TP阳性者，而且以性传播为主的梅毒，其感染者还有可能成为艾滋病毒的潜在传播者。导致梅毒抗体阳性和献血者乙肝表面抗原已成为导致血液报废的重要原因，仅次于ALT不合格。而为防止血液传染疾病，对献血者的血液梅毒与乙肝病毒初筛检测非常必要。
在早期为了方便献血者，血站大多采用金标HBsAg试纸条对献血者作HBsAg初筛，有效控制了因HBsAg阳性结果而导致的血液报废率。但是当前随着性病感染率在我国的逐年升高，在直接采血中因梅毒阳性而导致的血液报废率也逐渐提高。乙肝表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒的包膜蛋白，虽然本身没有传染性，但是HBsAg常伴随乙肝病毒的存在，为此HBsAg阳性是乙肝病毒感染的标志。梅毒螺旋体是引起人类梅毒的病原体，梅毒主要通过性接触、母婴垂直传播，也可通过血液传播，当病原体侵入人体后，可刺激机体免疫系统产生梅毒螺旋体特异性抗体。HBsAg/TP联合检测试剂作为一项薪型体外诊断技术当前得到了广泛应用，其应用原理是在硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg单抗和金标一特异性梅毒基因重组抗原，再对硝酸纤维素膜上的2条检测线和对照线上依次包被抗-HBsAg单抗、特异性梅毒基因重组抗原和羊抗鼠IgG分别进行检测，适用于乙型肝炎表面抗原和梅毒螺旋体早期感染的辅助诊断。
为了降低血液报废率，保证血液质量，我站从2015年5月开始，对献血者进行乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体的联合检测，取得了明显的成效，梅毒螺旋体抗体阳性的检测率明显下降，与相关研究结果一致。同时乙型肝炎病毒表面抗原的阳性检测率也有所降低，分析其原因可能是：（1）HBsAg/TP联合检测试剂，要求全血或血浆（血清）量为60～80μL，加样15min后观察和判断结果，而以往单HBsAg检测试剂要求全血或血浆（血清）量为70μL，在加样10min后观察和判断结果，易出现假阴性，联合试剂的加样量增加了，观察和判断结果的时间也增加了，部分弱反应性的血液样本也能被检测出来；（2）血液初筛对环境有严格的要求，如温度、湿度，2015年5月份开始，我站外采组更改了血液采集流程，血液初筛从以往在车外进行改为在车里进行，车箱内温度维持在20～25℃之间，湿度维持在40%～70%，同时车箱内安静不受干扰，更利于工作人员的操作，血液的加样量和试剂反应时间等到保证，结果更加可靠。同时有血站认为，对于初次献血者，需要做乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体的联合检测，而以往检测合格的重复献血者不需要做以上两种检测，本研究认为，此做法只适用于《血站技术操作规程（2012版）》要求，血液初筛项目只有血红蛋白（Hb）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）血液检测的血站，从降低血液报废率，节约实验室检测成本的角度考虑，我们认为初次献血者和重复献血者检测乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体是必要的。
总之，使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法）进行血液初筛，操作简单、可靠，能大大降低血液的报废率，值得在各大血站推广。
[关键词]HBV；TP；HBsAg/TP联合检测试剂；血液初筛；实验室检测
当前我国乙肝病毒感染与梅毒疫情流行形势日益严重，呈持续增长和局部高流行态势，乙肝病毒与梅毒正从高危人群向一般人群扩散，在无偿献血人群中乙肝病毒与梅毒感染者检出率不断增多。乙型肝炎病毒和梅毒螺旋体病毒也是目前我国采供血机构对献血者进行血液检测的必检项目，也是血液报废的重要原因。当前梅毒的实验室检测方法主要有病原学检查和血清学试验，血清学试验又梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（rTA-ABS）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）等；乙肝病毒的检测主要为HBsAg、抗-HBV检测等，而ELISA法在临床应用的时间较早，金标法是近年建立起来的免疫学检测法。为了提高工作效率，避免不必要的血液报废，2015年5月，我站开始使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法，HBsAg/TP）对无偿献血者进行初筛，取得较好的成效，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选择2014年9月～2015年12月，在东莞市中心血站献血的献血者为研究对象，共89762人，其中2014年9月～2015年4月献血人数43 952人为对照组，其中男23 852例，女20000例；年龄19～67岁，平均（45.2±3.1）岁；血液初筛项目：血型、乙型肝炎表面抗原、血红蛋白、谷氨酸氨基转移酶；2015年5月～2015年12月献血人数45 810人为观察组，其中男24 810例，女21 000例；年龄18～68岁，平均（45.1±4.1）岁；血液初筛项目：应用HBsAg/TP联合检测试剂检测乙型肝炎表面抗原和梅毒抗体，其他检测项目与对照组相同。两组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2检测仪器和方法
初筛用厦门英科新创公司HBsAg/TP胶体金联合检测试纸条（批号7J0615，8F0619），复检用北京万泰生物科技有限公司梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（批号N20071207，N20090101）、珠海丽珠生物科技有限公司梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（批号20071107，20081223）、乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（批号20140921，20151009）和罗氏诊断产品有限公司核酸检测试剂盒（批号L046010，L274420）。所用试剂均为中国药品生物制品检定所批批检合格，在有效期内使用。检测仪器包括Thermo Electron移液器，TECANEVO 200/8全自动加样系统，德国Dade BehringBEPIII全自动酶免疫分析系统，Hamilton STAR全自动混样器COBAS AmpliPrep全自动提取仪COBAS Taqman Analyzer全自动扩增仪，仪器均在校准期内。
初筛为手工加样，复检采用ELISA双抗原夹心法、ELISA双抗体夹心法和核酸检测法，由有资质的检验人员进行检验。对89762份标本不合格率进行分析，检验结果判定：两种试剂均为无反应性定义为合格，无论其中一种试剂为反应性定义为不合格。
1.3统计学处理
选择SPSS14.00软件进行数据分析，计数资料以%表示，采用x2检验，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组乙肝检测情况比较
使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法）进行血液初筛后，因乙肝阳性而报废率的血液从0.68%下降至0.56%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2两组梅毒检测情况比较
经过检测，梅毒螺旋体抗体阳性报废率的血液从原来的0.68%下降至0.21%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3讨论
众所周知，我国是乙肝大国，2014年乙型肝炎病例报告90多万例，据估算全国约有3000万乙型肝炎患者，全国各地血站按《献血者健康检查要求》，把乙型肝炎表面抗原检测作为血液初筛的必检项目，有效减低血液报废率，梅毒近年来也呈流行趋势，已不再局限于高危人群，不同人群均有抗-TP阳性者，而且以性传播为主的梅毒，其感染者还有可能成为艾滋病毒的潜在传播者。导致梅毒抗体阳性和献血者乙肝表面抗原已成为导致血液报废的重要原因，仅次于ALT不合格。而为防止血液传染疾病，对献血者的血液梅毒与乙肝病毒初筛检测非常必要。
在早期为了方便献血者，血站大多采用金标HBsAg试纸条对献血者作HBsAg初筛，有效控制了因HBsAg阳性结果而导致的血液报废率。但是当前随着性病感染率在我国的逐年升高，在直接采血中因梅毒阳性而导致的血液报废率也逐渐提高。乙肝表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒的包膜蛋白，虽然本身没有传染性，但是HBsAg常伴随乙肝病毒的存在，为此HBsAg阳性是乙肝病毒感染的标志。梅毒螺旋体是引起人类梅毒的病原体，梅毒主要通过性接触、母婴垂直传播，也可通过血液传播，当病原体侵入人体后，可刺激机体免疫系统产生梅毒螺旋体特异性抗体。HBsAg/TP联合检测试剂作为一项薪型体外诊断技术当前得到了广泛应用，其应用原理是在硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg单抗和金标一特异性梅毒基因重组抗原，再对硝酸纤维素膜上的2条检测线和对照线上依次包被抗-HBsAg单抗、特异性梅毒基因重组抗原和羊抗鼠IgG分别进行检测，适用于乙型肝炎表面抗原和梅毒螺旋体早期感染的辅助诊断。
为了降低血液报废率，保证血液质量，我站从2015年5月开始，对献血者进行乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体的联合检测，取得了明显的成效，梅毒螺旋体抗体阳性的检测率明显下降，与相关研究结果一致。同时乙型肝炎病毒表面抗原的阳性检测率也有所降低，分析其原因可能是：（1）HBsAg/TP联合检测试剂，要求全血或血浆（血清）量为60～80μL，加样15min后观察和判断结果，而以往单HBsAg检测试剂要求全血或血浆（血清）量为70μL，在加样10min后观察和判断结果，易出现假阴性，联合试剂的加样量增加了，观察和判断结果的时间也增加了，部分弱反应性的血液样本也能被检测出来；（2）血液初筛对环境有严格的要求，如温度、湿度，2015年5月份开始，我站外采组更改了血液采集流程，血液初筛从以往在车外进行改为在车里进行，车箱内温度维持在20～25℃之间，湿度维持在40%～70%，同时车箱内安静不受干扰，更利于工作人员的操作，血液的加样量和试剂反应时间等到保证，结果更加可靠。同时有血站认为，对于初次献血者，需要做乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体的联合检测，而以往检测合格的重复献血者不需要做以上两种检测，本研究认为，此做法只适用于《血站技术操作规程（2012版）》要求，血液初筛项目只有血红蛋白（Hb）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）血液检测的血站，从降低血液报废率，节约实验室检测成本的角度考虑，我们认为初次献血者和重复献血者检测乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋体是必要的。
总之，使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋体抗体联合检测试剂（胶体金法）进行血液初筛，操作简单、可靠，能大大降低血液的报废率，值得在各大血站推广。