【摘 要】
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[目的]探究miR-125a通过靶向调节p53的表达对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡以及放射治疗敏感性的影响.[方法]培养人喉癌Hep-2细胞系,利用慢病毒分别转染miR-125a与空白质粒,RT-P
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第一医院,黑龙江哈尔滨150001
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[目的]探究miR-125a通过靶向调节p53的表达对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡以及放射治疗敏感性的影响.[方法]培养人喉癌Hep-2细胞系,利用慢病毒分别转染miR-125a与空白质粒,RT-PCR法检测转染后各组细胞中miR-125a水平,采用MTT法检测细胞增殖情况.X线照射各组细胞后,行克隆形成实验、微核检测和流式细胞检测法检测转染细胞凋亡水平及放射敏感性,通过在线软件预测p53基因为miR-125a直接调控的靶基因,Western blot检测凋亡相关蛋白水平并进一步验证miR-125a与p53的关系,及在喉癌细胞放射治疗中的作用.[结果] MTT实验结果示,转染miR-125a后Hep-2细胞增殖能力明显下降(P＜0.05).克隆形成实验与微核检测结果表明高表达miR-125a可使Hep-2细胞放射敏感性显著提高.流式细胞仪检测结果0Gy下Hep-2-miR-125a、Hep-2-con220组,10Gy下Hep-2-miR-125a、Hep-2-eon220组凋亡率分别为(6.30％±0.11％),(0.09％±0.02％),(18.15％±2.49％),(1.95％±0.08％)(P＜0.01).TargetScan软件预测TRIAP1 (TP53 regulated inhibitor of apoptosis 1)为miR-125a的直接调控的靶基因,Western blot实验结果显示高表达miR-125a可正向调控p53的表达,从而增强Hep-2细胞对X线的放射敏感性.[结论]MiR-125a表达上调后可能通过上调p53的表达使Hep-2细胞增殖受到抑制,诱使其发生凋亡,并提高放射敏感性.
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