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限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是一类能够识别DNA 的特异序列并在识别位点剪切双链DNA的核酸内切酶.主要存在于原核生物中,大多数来自于细菌体内,与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系,限制外源DNA、保护内源DNA.1970年Smith等分离到第一种限制性核酸内切酶Ⅱ型,为DNA分子体外剪切奠定了技术基础.