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目的：建立快速检测金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、及氨基糖苷类耐药基因四重PCR检测方法。方法：根据金黄色葡萄球菌种属鉴定nuc基因和MRSA检测基因mecA、氨基糖苷类检测基因acc(6′)-Ⅰe+aph(2″)和aph(3’)-Ⅲa，建立四重PCR检测方法。评价方法特异性及灵敏度，并检测实际样品分离株验证方法可行性与实用性。结果：该方法可准确特异性检测nuc、mecA、acc(6′)-Ⅰe+aph(2″)、aph(3’)-Ⅲa等四种基因，检测灵敏度可达2.3×103cfu/ml。结论：本文所建立四重PCR方法快速、准确，具有良好特异性、灵敏度,可同时检测金黄色葡萄球菌、MRSA及氨基糖苷类耐药基因。