【摘 要】
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人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚。本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase,Fluc）报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础。通过PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,克隆入去掉EGFP基因的人3型腺病毒穿梭质粒pSKA3E3LR（EGFP）,经双酶切后与人3型腺病毒骨架质粒pBRAd3-EGFP的PCR
【机 构】
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广州医科大学附属第一医院呼吸疾病国家重点实验室广州医科大学
【基金项目】
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国家自然科学基金（项目号:31570163）,题目:人B组腺病毒纤毛蛋白与DSG2受体亲和力的差异及其对病毒致病力的影响研究； 国家科技重大专项（项目号:2017ZX10103011003）,题目:发热呼吸道感染住院患者病原谱及病原特征研究;国家科技重大专项（项目号:2018ZX10102001）,题目:临床来源的呼吸道类突发急性传染病病毒分离培养及筛选鉴定；
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人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚。本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase,Fluc）报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础。通过PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,克隆入去掉EGFP基因的人3型腺病毒穿梭质粒pSKA3E3LR（EGFP）,经双酶切后与人3型腺病毒骨架质粒pBRAd3-EGFP的PCR扩增片段经重组酶Exnase体外重组的方法,得到中间载体,最后与pBRAd3-EGFP酶切片段连接,得到重组腺病毒质粒pAd3-LUC;转染AD293细胞,将包装成功的重组腺病毒rAd3-LUC纯化并免疫动物,分析重组腺病毒的特性和在小鼠体内的免疫反应。结果显示采用体外重组、酶切连接等方法成功获得到重组人3型腺病毒质粒pAd3-LUC,线性化的pAd3-LUC转染AD293细胞包装拯救得到重组腺病毒rAd3-LUC,观察到细胞病变和检测到荧光素酶的稳定表达,rAd3-LUC免疫小鼠抗血清可以识别并中和重组腺病毒rAd3-LUC（滴度约128～256）。本研究成功构建了E3区缺失并嵌入荧光素酶的复制型重组人3型腺病毒rAd3-LUC,为监控人3型腺病毒在人DSG2受体转基因小鼠体内复制及侵染等生命过程奠定基础。
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